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原文传递一种铀酰离子的检测方法

专利名称：	一种铀酰离子的检测方法
摘要：	本发明涉及一种铀酰离子的检测方法。其基于熵驱动的扩增和DNA酶循环剪切扩增方法，即铀酰离子特异性DNA酶的剪切产生DNA片段以启动熵驱动的扩增，从熵驱动的扩增释放的两个DNA序列是部分互补的，它们可以形成Mg2+特异性DNA酶的完整酶链，形成的酶链可以在金纳米粒子上循环剪切羧基荧光素标记的探针，导致羧基荧光素从金纳米粒子中离开并恢复荧光信号，该荧光信号与铀酰离子的浓度呈线性关系，通过荧光信号即可推算出铀酰离子浓度。该方法对铀酰离子具有良好选择性，最低检测限可低至13pM，且已成功用于实际水样中的铀酰离子检测。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	重庆;50
申请人：	重庆工商大学
发明人：	云雯;王瑞琪;吴虹;郭莉霞;李宁;唐永建;胡秋红
专利状态：	有效
申请日期：	2019-03-29T00:00:00+0800
发布日期：	2019-06-28T00:00:00+0800
申请号：	CN201910248578.1
公开号：	CN109946279A
代理机构：	南京中律知识产权代理事务所(普通合伙)
代理人：	沈振涛
分类号：	G01N21/64(2006.01);G;G01;G01N;G01N21
申请人地址：	404100 重庆市南岸区学府大道19号
主权项：	1.一种铀酰离子的检测方法，包括如下步骤： (1)金纳米粒子的修饰，合成的金纳米粒子与羧基荧光素标记的具有巯基基团的Mg2+特异性DNA酶的底物链一起孵育； (2)将铀酰离子特异性底物链和铀酰离子特异性DNA酶的酶链加热并在吗啉乙磺酸缓冲液(MES)中缓慢冷却，然后加入待测铀酰离子溶液用于DNA酶裂解反应，将反应后的溶液加入到Tris-HCl缓冲溶液，并加入DNA复合物和燃料链，反应后的溶液加入含有MgCl2的Tris-HCl溶液中，最后加入步骤(1)的修饰后的金纳米粒子；其中，DNA复合物是通过将序列S,R和Q在Tris-HCl缓冲溶液中加热到90摄氏度，逐渐冷却至室温形成DNA复合物结构； (3)通过石英比色皿从500nm至600nm测量荧光信号； (4)计算铀酰离子浓度，用标准曲线法，通过荧光强度计算铀酰离子浓度。 2.如权利要求1所述的方法，其特征在于步骤(1)中羧基荧光素标记的具有巯基基团的Mg2+特异性DNA酶的底物链为：HS-AAAAAAAAATTCTCTCTrAGGACAAAAAAA-FAM，步骤(3)中铀酰离子特异性DNA酶的酶链为：CTTCTACAACTCACTATrAGGAAGAGATGGACGTG，序列S：TTTTGTCAGCGATCCGGAAGCCGAATAGACGTAGG，序列Q：ATAGTGAGTTGTAGAAGTTCTCCTACGTCTATTCGGCTTCCGGAT；序列R：TATTCGGCCGGCACCCATGTGAGAGAACTTCTACAACT；燃料链为：ATCCGGAAGCCGAATAGACGTAGGAGAACTTCTACAACT。 3.如前述权利要求之一所述的方法，其特征在于步骤(1)具体为：使用柠檬酸盐还原HAuCl4来合成金纳米粒子，将1μM羧基荧光素标记的具有巯基基团的Mg2+特异性DNA酶的底物链与10nM金纳米粒子一起孵育12小时，然后，加入0.05％吐温20，然后以12,000rpm离心15分钟分离游离的羧基荧光素标记的具有巯基基团的Mg2+特异性DNA酶的底物链，最后，将修饰的金纳米粒子分散在10mM Tris-HCl(pH＝7.5)溶液中。 4.如前述权利要求之一所述的方法，其特征在于步骤(3)具体为：将100nM铀酰离子特异性DNA酶底物链和100nM铀酰离子特异性DNA酶的酶链加热至90℃并在含有300mM NaCl的10mM吗啉乙磺酸缓冲液(MES)缓冲液(pH＝5.5)中缓慢冷却，然后加入待测铀酰离子溶液用于室温下20分钟的DNA酶裂解反应，将反应后的溶液加入含有5mM MgCl2和0.1M NaCl的25mM Tris-HCl缓冲溶液(pH＝7.5)中，再加入50nM DNA复合物和50nM燃料链反应60分钟，反应后的溶液加入含有10mM MgCl2和0.1M NaCl的50mM Tris-HCl溶液(pH＝7.5)中，最后加入步骤(1)的修饰后的金纳米粒子再反应1小时。 5.一种检测水样中铀酰离子的方法，包括以下步骤： (1)将水样离心并用0.22μm膜过滤，然后在测试前将pH调节至5.5； (2)采用如权利要求1-4之一的方法对步骤(1)所得水样进行检测。
所属类别：	发明专利