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原文传递用于测量血浆肾素活性的方法和系统

专利名称：	用于测量血浆肾素活性的方法和系统
摘要：	公开了用于样品中定量AngI和/或测定血浆肾素活性的方法和系统。本文公开的方法和系统可以用于诊断高血压、醛甾酮增多症及肾素血管紧张素醛固酮系统(RAAS)的其它异常。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	美国;US
申请人：	美国控股实验室公司
发明人：	W·O·斯莱德;R·P·格兰特;C·M·舒夫特
专利状态：	有效
申请日期：	2017-11-17T00:00:00+0800
发布日期：	2019-07-02T00:00:00+0800
申请号：	CN201780071439.5
公开号：	CN109964131A
代理机构：	中国国际贸易促进委员会专利商标事务所
代理人：	于巧玲
分类号：	G01N33/68(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	美国北卡罗来纳
主权项：	1.一种测定样品中AngI的量的方法，所述方法包括∶ (a)在适于允许血浆肾素从样品中存在的血管紧张素原产生具有序列NH2-DRVYIHPFHL-COOH(SEQ ID NO:1)的AngI肽的条件下培养样品； (b)加入蛋白酶或化学水解试剂； (c)在允许所述蛋白酶或化学水解试剂水解AngI产生所定义的AngI裂解产物的条件下培养样品； (d)电离AngI裂解产物，产生一种或多种质谱可检测的离子；和 (e)通过质谱检测AngI裂解产物离子。 2.权利要求1的方法，进一步包括向样品中加入作为内标准的稳定的同位素-标记的AngI肽(SIL-AngI)。 3.权利要求2的方法，其中所述SIL-AngI为肽NH2-DRV^YIHP^F^HL-COOH(SEQ ID NO:3)，其中^指用重同位素标记的氨基酸。 4.权利要求3的方法，其中V^为(13C)5H11(15N)O2，具有+6的质量偏移；P^为(13C)5H9(15N)O2，具有+6的质量偏移；和F^为(13C)9H11(15N)O2，具有+6的质量偏移。 5.权利要求2的方法，其中所述SIL-AngI是使用用重同位素标记的其它氨基酸组合由肽NH2-DRVYIHPFHL-COOH(SEQ ID NO:1)生成的。 6.权利要求2的方法，其中在血浆肾素介导的AngI生成之前或之后，但在加入蛋白酶步骤之前，加入所述SIL-AngI肽。 7.权利要求2的方法，其中AngI裂解产物的量与蛋白酶产生的SIL-AngI裂解产物的量成正比。 8.权利要求1的方法，进一步包括产生多数校准标准的步骤，所述校准标准包括在合适的基质中已知量的AngI，其中所述参考标准为SEQ ID NO：1的AngI，其经历与样品AngI相同的步骤。 9.权利要求8的方法，其中通过比较样品中AngI的量与多数校准标准的至少一种中AngI的量来定量所述样品中AngI的量。 10.权利要求9的方法，其中所述校准标准包括范围为0.25至100ng/mL的AngI。 11.权利要求1的方法，其中所述蛋白酶为丝氨酸蛋白酶。 12.权利要求1的方法，其中所述蛋白酶为胰蛋白酶。 13.权利要求1的方法，其中所述化学水解试剂为甲酸、乙酸、盐酸或能够水解AngI的任何其它试剂。 14.权利要求1的方法，其中蛋白酶裂解产生具有序列NH2-VYIHPFHL-COOH(SEQ ID NO:2)的AngI裂解产物。 15.权利要求3的方法，其中所述蛋白酶产生具有序列NH2-V^YIHP^F^HL-COOH(SEQ IDNO:4)的SIL-AngI裂解产物。 16.权利要求1的方法，其中所述AngI离子选自具有质/荷比为513.3±2、269.2±2、392.7±2、257.1±2的离子。 17.权利要求2的方法，其中所述SIL-AngI离子选自具有质/荷比为524.3±2、779.5±269.2±2的离子。 18.权利要求1的方法，进一步包括在蛋白酶消化步骤之前终止血浆肾素活性。 19.权利要求18的方法，其中向样品中加入甲醇以终止血浆肾素活性。 20.权利要求19的方法，进一步包括蒸发甲醇，然后在蛋白酶消化步骤之前在缓冲液中重构所述样品。 21.权利要求1的方法，其中所述AngI裂解产物和任选的SIL-AngI裂解产物在进行质谱之前进行液相色谱。 22.权利要求1的方法，其中电离为具有选择反应监测(SRM)的正电喷雾电离。 23.权利要求1的方法，其中所述样品为得自患者的生物流体。 24.权利要求23的方法，其中所述生物流体为血浆。 25.权利要求24的方法，其中所述生物流体包括作为抗凝血剂的乙二胺四乙酸(EDTA)。 26.权利要求1的方法，进一步包括在培养步骤产生AngI之前，从样品中取出等分试样并测试EDTA的存在。 27.权利要求26的方法，其中测试EDTA的存在包括加入比色试剂邻-甲酚酞络合酮，以与样品中的钙离子反应，使得包括EDTA的样品保持颜色基本上未改变，而不具有EDTA的样品由于钙与比色试剂反应而颜色改变。 28.根据前述权利要求中任一项的测量血浆肾素活性(PRA)的方法，其中基于样品中AngI肽的量计算PRA的水平。 29.权利要求28的方法，其中所述血浆肾素活性定义为每单位时间生成的AngI的量。 30.权利要求28的方法，其中所述血浆肾素活性表示为ng/mL/hr。 31.权利要求28的方法，其中所述血浆肾素活性具有范围为约0.167-66.667ng/mL/hr的分析可测量的范围(AMR)。 32.权利要求28的方法，其中定量下限(LLOQ)为0.167ng/mL/hr，和定量上限(ULOQ)为66.667ng/mL/hr。 33.一种测定样品中AngI的水平和/或血浆肾素活性的系统，所述系统包括： (a)用于在从血管紧张素原生成AngI的条件下培养样品的操作台； (b)任选地，用于将SIL-AngI加入到所述AngI肽的操作台； (c)任选地，用于终止血浆肾素介导的AngI生成的操作台； (d)用于消化或化学水解所述AngI和所述任选加入的SIL-AngI以产生所述AngI和所述任选的SIL-AngI各自的裂解产物的操作台； (e)用于电离所述AngI和所述任选的SIL-AngI裂解产物以产生所述AngI裂解产物和所述任选的SIL-AngI裂解产物的多个带电荷气相离子的操作台；和 (f)用于通过质谱分析所述多个带电荷气相离子以测定所述样品中所述AngI裂解产物和所述任选的SIL-AngI裂解产物的存在和/或数量的操作台，其中所述裂解产物的量反映所述样品中血浆肾素的活性。 34.权利要求33的系统，进一步包括用于测试所述样品中EDTA存在的操作台。 35.权利要求33的系统，进一步包括用于使用液相色谱来色谱分离所述裂解产物的操作台。
所属类别：	发明专利