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原文传递一种检测TIM-3抗体活性的试剂盒和方法

专利名称：	一种检测TIM-3抗体活性的试剂盒和方法
摘要：	本发明提供了一种检测TIM‑3抗体活性的试剂盒和方法，其中包括表面上展示TIM‑3抗原或其功能片段以及报告基因基团的免疫细胞，以及包括与CD‑3抗体交联的微珠。通过混合所述免疫细胞、所述微珠、TIM‑3抗体，检测报告基因基团的活性进而判断TIM‑3抗体活性。该方法操作简单、灵敏度高、重复性好。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	上海;31
申请人：	上海药明生物技术有限公司
发明人：	潘隽;聂思惟;吴琼;刘静静;万雅莉;郭新东;郑勇;李竞
专利状态：	有效
申请日期：	2019-04-09T00:00:00+0800
发布日期：	2019-07-05T00:00:00+0800
申请号：	CN201910279725.1
公开号：	CN109975537A
代理机构：	北京安杰律师事务所
代理人：	杨剑;孙秀武
分类号：	G01N33/533(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	200131 上海市浦东新区富特中路299号
主权项：	1.一种试剂盒，其包含： (i)免疫细胞，所述免疫细胞的细胞表面上展示TIM-3抗原或其功能片段，以及报告基因基团；和 (ii)微珠，所述微珠与CD-3抗体交联。 2.如权利要求1所述的试剂盒，其进一步包括以下中的至少一种： 1)CD28抗体； 2)报告基因底物。 3.如权利要求1或2所述的试剂盒，其中，所述免疫细胞包括T细胞、B细胞、NK细胞、树突状细胞、单核细胞、巨噬细胞、粒细胞、肥大细胞中的一种以上；优选地，所述T细胞包括Jurkat细胞、HuT-78、CEM、Molt-4、MO、H9、MJ、TALL-104、Loucy、P116、J45.01、J.RT3-T3.5、MO、H9、MJ、TALL-104、Loucy、P116、J45.01、J.RT3-T3.5中的一种以上。 4.如权利要求1或2所述的试剂盒，所述报告基因包括氯霉素乙酰转移酶(cat)、β-半乳糖苷酶(LacZ)、葡萄糖醛酸酶(GUS)、二氢叶酸还原酶、荧光素酶、分泌型碱性磷酸酶(SEAP)、荧光蛋白家族诸如绿色荧光蛋白(GFP)、蓝色荧光蛋白(BFP)、增强型GFP(EGFP)和去稳定EGFP、红色荧光蛋白(RFP)中的一种以上。 5.如权利要求1或2所述的试剂盒，其中所述报告基因的靶启动子包括NFAT启动子、IL2启动子、PGK启动子、SV40启动子、GPC3启动子中的至少一种。 6.如权利要求1或2所述的试剂盒，其中，所述微珠为磁珠，优选为超顺磁珠，优选地，所述免疫细胞和微珠的个数比例范围为100∶1至1∶100。 7.如权利要求1或2所述的试剂盒，其中，所述TIM-3抗原或其功能片段为人源的，优选地，所述CD-3抗体为人源的，所述CD-28抗体为人源的。 8.一种检测TIM-3抗体活性的方法，其包括以下步骤： a)将免疫细胞和微珠接触，其中，所述免疫细胞的细胞表面上展示外源TIM-3抗原或其功能片段，以及所述免疫细胞能够表达报告基因；所述微珠与CD-3抗体交联； b)使所述免疫细胞与TIM-3抗体接触；以及 c)测量报告基因活性。 9.如权利要求8所述的方法，其中，在所述步骤a)中，使所述免疫细胞进一步和CD28抗体接触。 10.如权利要求8所述的方法，其中，所述免疫细胞包括T细胞、B细胞、NK细胞、树突状细胞、单核细胞、巨噬细胞、粒细胞、肥大细胞中的一种以上；优选地，所述T细胞包括Jurkat细胞、HuT-78、CEM、Molt-4、MO、H9、MJ、TALL-104、Loucy、P116、J45.01、J.RT3-T3.5中的一种以上。 11.如权利要求8所述的方法，其中，所述报告基因包括氯霉素乙酰转移酶(cat)、β-半乳糖苷酶(LacZ)、葡萄糖醛酸酶(GUS)、二氢叶酸还原酶、荧光素酶、分泌型碱性磷酸酶(SEAP)、荧光蛋白家族诸如绿色荧光蛋白(GFP)、蓝色荧光蛋白(BFP)、增强型GFP(EGFP)和去稳定EGFP、红色荧光蛋白(RFP)中的一种以上。 12.如权利要求8所述的方法，所述报告基因的靶启动子包括NFAT启动子、IL2启动子、PGK启动子、SV40启动子、GPC3启动子中的至少一种。 13.如权利要求8所述的方法，其中，所述微珠为磁珠，优选为超顺磁珠，优选地，所述免疫细胞和微珠的个数比例范围为100∶1至1∶100。 14.如权利要求10所述的方法，其中，所述TIM-3抗原或其功能片段为人源的，优选地，所述CD-3抗体为人源的，所述CD-28抗体为人源的。 15.如权利要求1至7任一项所述试剂盒在制备用于检测TIM-3抗体的免疫细胞活化功能的产品中的应用，优选地，所述免疫细胞包括T细胞、B细胞、NK细胞、树突状细胞、单核细胞、巨噬细胞、粒细胞、肥大细胞中的一种以上。
所属类别：	发明专利