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基于特异抗血清的棕榈酰化修饰蛋白质的检测方法
| 专利名称： | 基于特异抗血清的棕榈酰化修饰蛋白质的检测方法 |
| 摘要： | 本发明属生化分析领域，涉及一种新的基于特异抗血清的棕榈酰化修饰蛋白质的检测方法，本方法中将棕榈酰化修饰的短肽(Cys‑Acp‑Cys(Pal))偶联到载体蛋白质上作为抗原，制备出抗蛋白质棕榈酰化修饰的泛抗血清，并利用该抗血清特异性地分析生物样品中蛋白质的棕榈酰化修饰状态。本发明制得的泛抗血清特异性更好，效价更高；本方法能利用抗血清的特异性直接指示各类复杂样品中如细胞、体液或组织样本的棕榈酰化修饰蛋白质，假阳性率低，结合色谱‑质谱分析，可实现生物样本中棕榈酰化修饰蛋白质的高通量鉴定分析，操作简便、易行。本发明为高通量检测生物样本中蛋白质棕榈酰化修饰提供了有效的手段。 |
| 专利类型： | 发明专利 |
| 国家地区组织代码： | 上海;31 |
| 申请人： | 复旦大学 |
| 发明人： | 陆豪杰;方彩云;张晓勤 |
| 专利状态： | 有效 |
| 申请日期： | 2017-12-29T00:00:00+0800 |
| 发布日期： | 2019-07-09T00:00:00+0800 |
| 申请号： | CN201711499280.5 |
| 公开号： | CN109991422A |
| 分类号： | G01N33/68(2006.01);G;G01;G01N;G01N33 |
| 申请人地址： | 200433 上海市邯郸路220号 |
| 主权项： | 1.一种基于特异抗血清的棕榈酰化修饰蛋白质的检测方法，其特征在于，利用特异识别棕榈酰化修饰泛抗血清检测蛋白质的棕榈酰化修饰状态，其包括步骤： (1)以棕榈酰化修饰的短肽(Cys-Acp-Cys(Pal))作为半抗原，将其与载体蛋白质KLH偶联免疫实验动物，获得抗棕榈酰化修饰的泛抗血清；所述的Cys-Acp-Cys(Pal)中：Acp为氨基己酸，Pal为棕榈酰化修饰； (2)免疫后收集抗血清，并用ELISA技术检测抗血清的效价； (3)用收集的抗血清按不同的稀释比例对不同浓度的半抗原短肽进行免疫化学检测，考察抗血清的检测灵敏度和稀释比例； (4)用收集的抗血清免疫化学检测不同的细胞中的蛋白质棕榈酰化修饰状态及其水平的变化； (5)结合高分辨的质谱方法，对western blot检测结果阳性的蛋白质Lamin A进行鉴定分析，评价方法的可行性。 2.按权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)中，将棕榈酸通过硫酯键共价修饰到半胱氨酸的巯基上，与载体蛋白质KLH偶联后免疫实验动物；通过连接臂氨基己酸的引入，使抗原表位更突出，从而提高免疫效果。 3.按权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)中的抗血清为第6次免疫后收集。 4.按权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(4)中的细胞是具有不同转移潜能的细胞97L和LM3。 |
| 所属类别： | 发明专利 |
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