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原文传递一种评价烟草特有亚硝胺对动物体暴露风险的方法

专利名称：	一种评价烟草特有亚硝胺对动物体暴露风险的方法
摘要：	本发明涉及一种评价烟草特有亚硝胺对动物体暴露风险的方法。该方法包括以下步骤：1)检测TSNAs及其代谢产物的含量；计算AUC值，根据AUC值计算α‑羟基化系数；检测O6‑mG和O2‑POB‑dT含量；根据检测得到的O6‑mG和O2‑POB‑dT的含量值之和，获得代表性DNA加合物产量；2)根据α‑羟基化系数和代表性DNA加合物产量，评估α‑羟基化代谢程度，预测TSNAs对动物体的暴露风险。该方法根据α‑羟基化系数和代表性DNA加合物的产量来评估TSNAs暴露后在不同个体内的α‑羟基化反应程度，进而为评价TSNAs的潜在暴露风险提供量化指标。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	河南;41
申请人：	中国烟草总公司郑州烟草研究院
发明人：	张建勋;王磊;刘珊;范武;史清照;毛健;刘俊辉;孟庆华;冯明飞;赵贝贝;郎海磊;张启东;卢斌斌
专利状态：	有效
申请日期：	2019-04-12T00:00:00+0800
发布日期：	2019-07-09T00:00:00+0800
申请号：	CN201910295444.5
公开号：	CN109991353A
代理机构：	郑州睿信知识产权代理有限公司
代理人：	郭佳效
分类号：	G01N30/88(2006.01);G;G01;G01N;G01N30
申请人地址：	450001 河南省郑州市高新区枫杨街2号
主权项：	1.一种评价烟草特有亚硝胺对动物体暴露风险的方法，其特征在于，包括以下步骤： 1)将TSNAs暴露动物的血液样品进行预处理，检测TSNAs及其代谢产物的含量；根据检测得到的血液样品中TSNAs及其代谢产物的含量对暴露时间绘制浓度-时间曲线，计算AUC值，根据代谢产物的AUC之和除以TSNAs的AUC之和计算α-羟基化系数；将TSNAs暴露动物的肝脏组织样品进行预处理，检测O6-mG和O2-POB-dT的含量；根据检测得到的O6-mG和O2-POB-dT的含量值之和，获得代表性DNA加合物产量； 2)根据步骤1)得到的α-羟基化系数和代表性DNA加合物产量，评估α-羟基化代谢程度，预测TSNAs对动物体的暴露风险。 2.如权利要求1所述的评价烟草特有亚硝胺对动物体暴露风险的方法，其特征在于，步骤1)中，所述TSNAs为NNK、NNN、NNAL、NAB，所述代谢产物为HPB、PBD、OPBA、OPBAA、HPBA、HPBAA。 3.如权利要求1所述的评价烟草特有亚硝胺对动物体暴露风险的方法，其特征在于，步骤1)中，将TSNAs暴露动物的血液样品进行预处理包括：将血液样品进行离心分离，取上清液加入乙腈混合均匀，离心分离后取上清液。 4.如权利要求1或3所述的评价烟草特有亚硝胺对动物体暴露风险的方法，其特征在于，采用高效液相色谱-串联质谱法测定TSNAs及其代谢产物的含量，采用内标法定量，NNK、NNAL、NNN、NAB的对应内标为NNK-d4、NNAL-d3、NNN-d4、NAB-d4；HPB、PBD、OPBA和HPBA的内标均为HPB-d4。 5.如权利要求4所述的评价烟草特有亚硝胺对动物体暴露风险的方法，其特征在于，高效液相色谱-串联质谱法测定的色谱条件为：Waters Atlantis HILIC silica column色谱柱；柱温：25℃；进样量5μL，流速0.5mL/min；流动相A：10mmol/mL甲酸铵溶液，B：乙腈；洗脱梯度：0～2min内B由95％下降至85％，2～6min内由85％降至75％，于0.1min内升至95％，维持2min。 6.如权利要求4所述的评价烟草特有亚硝胺对动物体暴露风险的方法，其特征在于，高效液相色谱-串联质谱法测定的质谱条件为：电加热喷雾离子源，正离子模式，喷雾电压3.5kV；鞘气流速为9.9L/min，辅助气流速为3.3L/min，毛细管加热温度为320℃，加热器温度为300℃；扫描模式采用Full MS/ddMS2，一级全扫描分辨率为70000，范围为100～300m/z，自动增益控制为1e6，离子最大注入时间为50ms；二级扫描为数据依赖扫描，分辨率为17500，自动增益控制为1e5，最大注入时间为50ms，归一化的碰撞能量为35％。 7.如权利要求1所述的评价烟草特有亚硝胺对动物体暴露风险的方法，其特征在于，步骤1)中，将TSNAs暴露动物的肝脏组织样品进行预处理包括：将肝脏组织样品提取组织DNA，然后对组织DNA进行水解，固液分离，取固液分离后的液体过固相萃取柱，洗脱，洗脱液除去洗脱溶剂得到固体样品，固体样品用检测溶剂复溶，即得。 8.如权利要求1或7所述的评价烟草特有亚硝胺对动物体暴露风险的方法，其特征在于，采用高效液相色谱-串联质谱法测定O6-mG和O2-POB-dT的含量，采用内标法定量。 9.如权利要求8所述的评价烟草特有亚硝胺对动物体暴露风险的方法，其特征在于，高效液相色谱-串联质谱法测定的色谱条件为：Agilent Zorbax Eclipse XDB-C18色谱柱；柱温50℃；流动相A为甲酸水溶液，流动相B为乙腈；等度洗脱，流速0.20mL/min；进样量10μL。 10.如权利要求8所述的评价烟草特有亚硝胺对动物体暴露风险的方法，其特征在于，高效液相色谱-串联质谱法测定的质谱条件为：电加热喷雾离子源，正离子模式，喷雾电压3.5kV；鞘气流速为9.9L/min，辅助气流速为3.3L/min，毛细管加热温度为320℃，加热器温度为300℃；扫描模式采用Full MS/ddMS2，一级全扫描分辨率为70000，范围为100～400m/z，自动增益控制为1e6，离子最大注入时间为50ms；二级扫描为数据依赖扫描，分辨率为17500，自动增益控制为1e5，最大注入时间为50ms，归一化的碰撞能量为35％。
所属类别：	发明专利