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原文传递一种鉴定动物体内NAB代谢产物的方法和评价NAB在动物体内暴露风险的方法

专利名称：	一种鉴定动物体内NAB代谢产物的方法和评价NAB在动物体内暴露风险的方法
摘要：	本发明涉及一种鉴定动物体内NAB代谢产物的方法和评价NAB在动物体内暴露风险的方法。评价NAB暴露风险的方法包括：1)将动物血液样品进行离心，取上清液，向上清液中加入乙腈混合均匀后静置，得到混合样品；2)将混合样品进行离心，取上清液，固液分离，将所得液体进行超高效液相色谱串联轨道阱高分辨质谱检测；3)将分子量测量值与NAB的代谢产物的理论分子量相比对，依据比对结果，鉴定动物体内NAB的代谢产物；4)计算NAB及其代谢产物的AUC值，根据AUC值计算α‑羟基化系数，预测NAB对动物体的暴露风险。该方法可以为NAB在动物体内的代谢规律研究提供有效支撑，进而为评价NAB的潜在暴露风险提供量化指标。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	河南;41
申请人：	中国烟草总公司郑州烟草研究院
发明人：	张建勋;张文娟;席辉;宋瑜冰;屈展;毛健;刘帅东;柴国璧;张启东;曹保军;李琛;王荣浩;王丁众
专利状态：	有效
申请日期：	2019-04-12T00:00:00+0800
发布日期：	2019-07-09T00:00:00+0800
申请号：	CN201910296030.4
公开号：	CN109991355A
代理机构：	郑州睿信知识产权代理有限公司
代理人：	郭佳效
分类号：	G01N30/88(2006.01);G;G01;G01N;G01N30
申请人地址：	450001 河南省郑州市高新区枫杨街2号
主权项：	1.一种鉴定动物体内NAB代谢产物的方法，其特征在于，包括以下步骤： 1)将动物血液样品进行离心，取上清液，向上清液中加入乙腈混合均匀后静置，得到混合样品； 2)将混合样品进行离心，取上清液，固液分离，将所得液体进行超高效液相色谱串联轨道阱高分辨质谱检测； 3)将步骤2)检测得到的分子量测量值与NAB的代谢产物的理论分子量相比对，依据比对结果，鉴定动物体内NAB的代谢产物；所述NAB的代谢产物为NAB-N-氧化物，5-羰基-5-(3-吡啶基)-戊酸和5-羟基-5-(3-吡啶基)-戊酸。 2.如权利要求1所述的鉴定动物体内NAB代谢产物的方法，其特征在于，步骤1)中，所述动物血液样品为使用NAB及其吡啶环氘代的同位素标记物NAB-pyridine-d4同步暴露动物后收集得到的暴露动物血液样品。 3.如权利要求1或2所述的鉴定动物体内NAB代谢产物的方法，其特征在于，步骤3)中，提取NAB、NAB-pyridine-d4及其代谢物的母离子色谱峰，并进行质谱二级子离子质量信息比对，利用目标物与对应的氘代目标物的色谱保留时间一致和相应的二级子离子质量信息的一一对应，确证NAB的代谢产物。 4.如权利要求1所述的鉴定动物体内NAB代谢产物的方法，其特征在于，所述超高效液相色谱串联轨道阱高分辨质谱检测的色谱条件为：色谱柱：Waters Atlantis HILICsilica column；柱温：25℃；进样量5μL，流速0.5mL/min；流动相A：10mmol/mL甲酸铵溶液，B：乙腈；洗脱梯度：0-2min内B由95％下降至85％，2-6min内由85％降至75％，于0.1min内升至95％，维持2min。 5.如权利要求1所述的鉴定动物体内NAB代谢产物的方法，其特征在于，所述超高效液相色谱串联轨道阱高分辨质谱检测的质谱条件为：电加热喷雾离子源，正离子模式，喷雾电压3.5kV；鞘气流速为9.9L/min，辅助气流速为3.3L/min，毛细管加热温度为320℃，加热器温度为300℃；扫描模式采用Full MS/ddMS2，一级全扫描分辨率为70000，范围为100-250m/z，自动增益控制为1e6，离子最大注入时间为50ms；二级扫描为数据依赖扫描，分辨率为17500，自动增益控制为1e5，最大注入时间为50ms，归一化的碰撞能量为35％。 6.如权利要求1所述的鉴定动物体内NAB代谢产物的方法，其特征在于，步骤1)中，所述静置在冰浴中进行，静置的时间为20-40min。 7.如权利要求1所述的鉴定动物体内NAB代谢产物的方法，其特征在于，步骤2)中，所述离心的温度为1-6℃。 8.一种评价NAB在动物体内暴露风险的方法，其特征在于，包括以下步骤： 1)将NAB暴露动物血液样品进行离心，取上清液，向上清液中加入乙腈混合均匀后静置，得到混合样品； 2)将混合样品进行离心，取上清液，固液分离，将所得液体进行超高效液相色谱串联轨道阱高分辨质谱检测； 3)将步骤2)检测得到的分子量测量值与NAB的α-羟基化代谢产物的理论分子量相比对，依据比对结果，鉴定动物体内NAB的α-羟基化代谢产物；所述NAB的α-羟基化代谢产物为5-羰基-5-(3-吡啶基)-戊酸和5-羟基-5-(3-吡啶基)-戊酸； 4)根据不同暴露时间下NAB及其α-羟基化代谢产物的浓度，绘制NAB及其α-羟基化代谢产物的浓度-时间曲线，计算曲线下面积AUC值，以α-羟基化代谢产物的AUC之和除以NAB的AUC计算α-羟基化系数；根据α-羟基化系数评价NAB的暴露风险。
所属类别：	发明专利