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原文传递一种金银花体内代谢产物的识别方法

专利名称：	一种金银花体内代谢产物的识别方法
摘要：	本发明公开了一种金银花体内代谢产物的识别方法，包括如下步骤：制备金银花醇提物，给实验组动物连续灌胃几天，对照组灌胃等量生理盐水；每次灌胃后禁食8小时，取血样，通过超高效液相色谱‑高分辨质谱联用分析血样，得到包含质量数、保留时间和峰强度的峰值表；对实验组和对照组进行灌胃天数和金银花的双因素方差分析，筛选出只受金银花影响的变量，然后从只受金银花影响的变量中筛选出可能的金银花代谢产物；对可能的金银花代谢产物进行二级质谱分析，通过二级质谱中性丢失80确定为硫酸化代谢产物，中性丢失176确定为葡萄糖醛酸化代谢产物；二级质谱中同时出现中性丢失80和中性丢失176为葡萄糖醛酸苷的硫酸化代谢产物。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	山东;37
申请人：	山东省分析测试中心
发明人：	李丽丽;王晓;刘伟;马双双;于金倩;陈龙
专利状态：	有效
申请日期：	2019-06-05T00:00:00+0800
发布日期：	2019-08-20T00:00:00+0800
申请号：	CN201910486127.1
公开号：	CN110146617A
代理机构：	济南圣达知识产权代理有限公司
代理人：	张晓鹏
分类号：	G01N30/02(2006.01);G;G01;G01N;G01N30
申请人地址：	250014 山东省济南市历下区科院路19号
主权项：	1.一种金银花体内代谢产物的识别方法，其特征在于：包括如下步骤：制备金银花醇提物，给实验组动物连续灌胃几天，对照组灌胃等量的生理盐水；灌胃后禁食8小时，取血样，通过超高效液相色谱-高分辨质谱分析血样，得到包含质量数、保留时间和峰强度的峰值表；对实验组和对照组进行金银花和灌胃时间的双因素方差分析，筛选出只受金银花影响的变量，从只受金银花影响的变量中筛选出可能的金银花代谢产物；对可能的金银花代谢产物进行二级质谱分析，通过二级质谱中性丢失80确定为硫酸化代谢产物，中性丢失176确定为葡萄糖醛酸化代谢产物；二级质谱中同时出现中性丢失80和中性丢失176为葡萄糖醛酸苷的硫酸化代谢产物。 2.根据权利要求1所述的识别方法，其特征在于：所述金银花醇取物为金银花的甲醇/水提取液或乙醇/水提取液，醇与水的体积比为1:0.8-1.2，金银花与醇/水提取液的质量比为3:900-1100。 3.根据权利要求1所述的识别方法，其特征在于：所述血样为血清或血浆。 4.根据权利要求3所述的识别方法，其特征在于：所述血样采用提取试剂进行提取，得上清液，冻干、复溶，然后采用复溶试剂进行复溶，复溶后进行液相色谱-质谱分析，所述提取试剂为乙腈或甲醇。 5.根据权利要求4所述的识别方法，其特征在于：所述复溶试剂为乙腈/水溶液或甲醇/水溶液，其中水的体积分数为50％-95％。 6.根据权利要求1所述的识别方法，其特征在于：连续灌胃的时间为3-7天。 7.根据权利要求1所述的识别方法，其特征在于：液相色谱-质谱分析中，液相色谱的色谱条件为：色谱柱为超高效液相色谱柱WatersHSS T3 column，2.1×100mm,1.8μm；正离子模式：流动相A和B分别为含有0.1％甲酸的水溶液和含有0.1％甲酸的乙腈溶液。进样量5μL，流速0.3mL/min。洗脱梯度为0-1min,5％B；1-6min,5-40％B；6-8min,40-60％B；8-15min,60-85％B,15-18min,85-100％B；18-23min,100％B；23-23.1min,100-5％B；23.1-28min,5％B，柱温45℃；负离子模式下，流动相C和D分别为含有6.5mM碳酸氢铵的水溶液和甲醇/水溶液(95:5,v/v)，进样量5μL，流速0.35ml/min，洗脱梯度为1-3min,2-40％B；3-5min,40-65％B；5-8min,65-92％B；8-12min,92％B；12-13min,100％B；18-18.1min,100-2％B；18.1-23min,2％B，柱温50℃。 8.根据权利要求1所述的识别方法，其特征在于：质谱条件为：喷雾器，2.0Bar；干燥气，8L/min；干燥气温度，200℃；离子漏斗，300Vpp；六级杆，60Vpp；传输时间，80μs；毛细管电压正模式下设置为3500V，负模式下设置为3000V；质量数扫描范围为5-1200，二级质谱碰撞能设定为20eV-50eV。 9.根据权利要求1所述的识别方法，其特征在于：在筛选金银花代谢产物时，根据空白背景将噪声设置为1000，信噪比设置为50。 10.根据权利要求1所述的识别方法，其特征在于：硫酸化代谢产物为：二氢香豆酸-硫酸盐、二氢咖啡酸-硫酸盐、二氢阿魏酸-硫酸盐、邻苯二酚-硫酸盐；葡萄糖醛酸化代谢产物：芹菜素-葡萄糖醛酸苷、芹菜素-甲基醚-葡萄糖醛酸苷和5-羟基-6-甲氧基吲哚-葡萄糖醛酸苷；葡萄糖醛酸苷-硫酸化代谢产物：芹菜素-葡萄糖醛酸苷-硫酸盐和异鼠李素-葡萄糖醛酸苷-硫酸盐。
所属类别：	发明专利