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原文传递用于检测C反应蛋白的试剂盒、其制备方法及用途

专利名称：	用于检测C反应蛋白的试剂盒、其制备方法及用途
摘要：	本申请涉及免疫学检测领域。具体而言，本申请涉及一种用于免疫比浊法检测C反应蛋白的试剂盒，其包含含有电解质、促凝剂、表面活性剂、防腐剂和缓冲液的第一试剂组合物，以及含有两种具有不同平均粒径的不溶性载体颗粒群以及保存液的第二试剂组合物。本发明的C反应蛋白检测试剂盒可以用于全血样本C反应蛋白浓度测定，具有灵敏度高、检测上限宽、测试速度快、稳定性好、生产成本低等优点。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	广西;45
申请人：	桂林优利特医疗电子有限公司
发明人：	周永杨;周剑青;黄钦彬
专利状态：	有效
申请日期：	2019-04-18T00:00:00+0800
发布日期：	2019-07-12T00:00:00+0800
申请号：	CN201910312141.X
公开号：	CN110007074A
代理机构：	中国国际贸易促进委员会专利商标事务所
代理人：	杨棽;李程达
分类号：	G01N33/543(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	541004 广西壮族自治区桂林市高新区信息产业园D-07号
主权项：	1.一种用于免疫比浊法检测C反应蛋白的试剂盒，其包含： (a)第一试剂组合物，其包含电解质、促凝剂、表面活性剂、防腐剂和缓冲液；和， (b)第二试剂组合物，其包含：两种具有不同平均粒径的不溶性载体颗粒群，其中，平均粒径小的不溶性载体颗粒群中所包含的不溶性载体颗粒的表面包被有低亲和力的羊抗人CRP多克隆抗体，平均粒径大的不溶性载体颗粒群中所包含的不溶性载体颗粒的表面包被有高亲和力的羊抗人CRP多克隆抗体；以及，保存液，其包含稳定剂、表面活性剂、防腐剂和缓冲液；其中，所述低亲和力的羊抗人CRP多克隆抗体以不低于约1×10-8M的KD值结合人CRP，所述高亲和力的羊抗人CRP多克隆抗体以不高于约1×10-8M的KD值结合人CRP。 2.权利要求1所述的试剂盒，其具备以下特征中的一项或多项： (1)所述平均粒径小的不溶性载体颗粒群的平均粒径为50-150nm； (2)所述平均粒径大的不溶性载体颗粒群的平均粒径为200-450nm； (3)所述平均粒径小的不溶性载体颗粒群与所述平均粒径大的不溶性载体颗粒群的质量比为4：1～8：1； (4)所述不溶性载体颗粒群中所包含的不溶性载体颗粒为聚苯乙烯微球； (5)所述低亲和力的羊抗人CRP多克隆抗体以约1×10-5M-约1×10-8M的KD值结合人CRP； (6)所述高亲和力的羊抗人CRP多克隆抗体以约1×10-8M-约1×10-11M的KD值结合人CRP； (7)所述低亲和力的羊抗人CRP多克隆抗体是绵羊抗人CRP多克隆抗体； (8)所述高亲和力的羊抗人CRP多克隆抗体是山羊抗人CRP多克隆抗体。 3.权利要求1或2所述的试剂盒，其中，所述第一试剂组合物和第二试剂组合物中所包含的表面活性剂为Triton X-100和十二烷基羟丙基磷酸酯甜菜碱；优选地，所述Triton X-100与十二烷基羟丙基磷酸酯甜菜碱的质量比为3:1～8:1；优选地，所述Triton X-100与十二烷基羟丙基磷酸酯甜菜碱的质量比为3：1。 4.权利要求1-3任一项所述的试剂盒，其具备以下特征中的一项或多项： (1)所述电解质选自氯化钠、氯化镁、氯化钾、氯化铵、硫酸钠，及其任意组合； (2)所述促凝剂选自聚乙二醇8000、聚乙二醇10000、硫酸葡聚糖钠、聚乙二醇20000、聚乙烯吡咯烷酮，及其任意组合； (3)所述缓冲液选自甘氨酸缓冲液、磷酸盐缓冲液、三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲液、硼酸盐缓冲液，及其任意组合； (4)所述防腐剂选自ProClin系列、苯酚、叠氮化钠、对羟基苯甲酸，及其任意组合； (5)所述稳定剂选自牛血清白蛋白、乙二胺四乙酸二钠、甘氨酸，及其任意组合。 5.权利要求1-4任一项所述的试剂盒，其中：所述第一试剂组合物由以下成分组成：氯化钠、聚乙二醇10000、Triton X-100、十二烷基羟丙基磷酸酯甜菜碱、叠氮化钠、甘氨酸以及余量的水(例如，纯化水、去离子水、蒸馏水)；和/或，所述第二试剂组合物所包含的保存液由以下成分组成：氯化钠、牛血清白蛋白、乙二胺四乙酸二钠、Triton X-100、十二烷基羟丙基磷酸酯甜菜碱、叠氮化钠、甘氨酸以及余量的水(例如，纯化水、去离子水、蒸馏水)。 6.权利要求1-5任一项所述的试剂盒，其中，所述试剂盒还包含一种或多种选自下列的试剂或装置：标准品(例如，含有不同已知量的CRP的系列样品)；阳性对照样品(例如，含有已知量的CRP的样品)；阴性对照样品(例如，不含有CRP的样品)；抗凝剂(例如肝素)；和，采血装置(例如，无热原真空采血管)。 7.一测定样品中CRP的存在或其量的免疫比浊法，其包括以下步骤： (1)在抗原-抗体复合物形成所允许的条件下，将第二试剂组合物与所述样品接触，其中所述第二试剂组合物如权利要求1-6任一项中所定义； (2)测定步骤(1)的反应体系的浊度变化； (3)将步骤(2)所获得的浊度变化与表示CRP的已知量与所述浊度变化的关系的标准曲线比较，并获得CRP的含量；优选地，所述方法用于非诊断目的。 8.权利要求7所述的方法，其中，所述样品是血浆或血清。 9.权利要求7所述的方法，其中，所述样品是全血(例如抗凝全血)；优选地，在步骤(1)之前，所述方法还包括：将权利要求1-6任一项中所定义的第一试剂组合物与所述样品接触，以溶解红细胞。 10.权利要求7-9任一项所述的方法，其中，在步骤(2)中，通过光学方法测定步骤(1)的反应开始后一定时间内(例如，0-5分钟，0-2分钟，5-120秒，或5-60秒)在规定波长处的吸光度或散射光的变化量，以其作为所述步骤(1)的反应体系的浊度变化；优选地，在步骤(2)中，在步骤(1)的反应开始后0-120秒内(例如5-120秒，例如5-60秒)对反应体系在规定波长处的吸光度进行2次测定，以其差值作为吸光度的变化量(也即，浊度变化)；优选地，在步骤(2)中，在步骤(1)的反应开始后第10秒和第60秒分别对反应体系在规定波长处的吸光度进行测定，以其差值作为吸光度的变化量(也即，浊度变化)；优选地，所述规定波长为800-900nm，例如840-860nm，例如850nm；优选地，所述规定波长为850nm；优选地，在步骤(2)中，在步骤(1)的反应开始后第10秒和第60秒分别对反应体系在850nm处的吸光度进行测定，以其差值作为吸光度的变化量(也即，浊度变化)。 11.一种制备抗体包被的不溶性载体颗粒群的方法，其包括以下步骤： (1)提供两种具有不同平均粒径的不溶性载体颗粒群； (2)将平均粒径小的不溶性载体颗粒群与第一抗体孵育，以将所述第一抗体连接于所述平均粒径小的不溶性载体颗粒群中所包含的不溶性载体颗粒的表面； (3)将平均粒径大的不溶性载体颗粒群与第二抗体孵育，以将所述第二抗体连接于所述平均粒径大的不溶性载体颗粒群中所包含的不溶性载体颗粒的表面； (4)将步骤(3)的产物与步骤(2)的产物混合； (5)将步骤(4)的产物与封闭剂一起孵育；其中，步骤(2)和(3)可以以任意顺序进行；优选地，所述不溶性载体颗粒是聚苯乙烯微球；优选地，所述平均粒径小的不溶性载体颗粒群的平均粒径为50-150nm；优选地，所述平均粒径大的不溶性载体颗粒群的平均粒径为200-450nm；优选地，在步骤(4)之后还包括离心分离；优选地，所述离心分离的条件为8000r/min、35min、4℃；优选地，在步骤(5)之后还包括将步骤(5)的产物加入保存液的步骤，所述保存液如权利要求1-6任一项中所定义；优选地，在步骤(2)中，通过共价偶联或物理吸附将所述第一抗体连接于不溶性载体颗粒的表面；优选地，在步骤(3)中，通过共价偶联或物理吸附将所述第二抗体连接于不溶性载体颗粒的表面；优选地，在步骤(5)中，所述封闭剂是牛血清白蛋白。 12.权利要求1-6任一项所述的试剂盒在制备用于诊断或辅助诊断感染性疾病和/或心血管疾病的试剂中的用途；优选地，所述感染性疾病是细菌感染、炎症或组织损伤；优选地，所述心血管疾病选自冠心病、急性心肌梗死、心衰或房颤。
所属类别：	发明专利