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原文传递一种登革病毒NS1抗原检测试纸条、试剂盒及其制备方法

专利名称：	一种登革病毒NS1抗原检测试纸条、试剂盒及其制备方法
摘要：	本发明公开了一种登革病毒NS1抗原检测试纸条、试剂盒及其制备方法，涉及登革病毒检测技术领域。本发明公开的登革病毒NS1抗原检测试纸条，包括依次贴于聚氯乙烯底部上的样品垫、包被了标记有胶体金的抗登革病毒NS1单克隆抗体的免疫结合垫、包被了抗登革病毒NS1单克隆抗体的检测线T和羊抗鼠IgG多抗的质控线C的硝酸纤维素膜和吸水纸；该试纸条可通过检测标记物的方法检测待检样品中是否存在登革病毒NS1抗原；该试纸条和包括有该试纸条的检测卡可特异快速地进行登革病毒早期感染的检测与诊断，减低成本，快速检测，有效满足临床使用的需要。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	江苏;32
申请人：	江苏硕世生物科技股份有限公司
发明人：	童国权;杨标;金巍;刘中华;王国强
专利状态：	有效
申请日期：	2019-05-06T00:00:00+0800
发布日期：	2019-07-12T00:00:00+0800
申请号：	CN201910373380.6
公开号：	CN110007095A
代理机构：	南京苏科专利代理有限责任公司
代理人：	徐振兴;姚姣阳
分类号：	G01N33/68(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	225300 江苏省泰州市医药高新区药城大道1号G19三楼
主权项：	1.一种登革病毒NS1抗原检测试纸条的制备方法,其特征在于,包括以下步骤： a.用氯化金溶液和柠檬酸三钠溶液制备胶体金溶液； b.碳酸钾调节步骤a得到的胶体金溶液的pH至6.5-8.0，依次加入抗登革病毒NS1单克隆抗体、牛血清白蛋白溶液，离心得到沉淀，重悬液重悬沉淀得到胶体金标记的抗登革病毒NS1单克隆抗体溶液； c. 用结合垫处理液均匀喷涂在结合垫上进行预处理，预处理结束后用步骤b得到的抗登革病毒NS1单克隆抗体标记的胶体金溶液对结合垫喷金得到免疫结合垫,划膜结束后将免疫结合垫置于室温，湿度≤30%条件下干燥1小时； d.用包被缓冲液稀释抗登革病毒NS1单克隆抗体得到检测线工作液；用包被缓冲液稀释羊抗鼠IgG多抗得到质控线工作液；用检测线工作液和质控线工作液分别在贴于聚氯乙烯底板的硝酸纤维素膜上划线，划膜结束后将膜置于37℃干燥箱中干燥24小时； e.用样品垫处理液均匀喷涂在样品垫上进行预处理； f.将样品垫和免疫结合垫贴于划膜的硝酸纤维素膜下方，将吸水纸贴于划膜的硝酸纤维素膜的上方得到登革病毒NS1抗原检测试纸条。 2.根据权利要求1所述的登革病毒NS1抗原检测试纸条的制备方法，其特征在于：胶体金标记用的抗登革病毒NS1单克隆抗体为NS1 mAb5，硝酸纤维素膜包被用的抗登革病毒NS1单克隆抗体为NS1 mAb6。 3.根据权利要求1所述的登革病毒NS1抗原检测试纸条的制备方法，其特征在于：步骤a所述的具体制备步骤为称取990g水于三角烧瓶中，加入10ml 浓度为2%的氯化金溶液，即溶液中氯化金的终浓度为0.02%，将烧瓶置于磁力搅拌器上加热至沸腾，迅速加入13ml浓度为2%的柠檬酸三钠溶液，待溶液变为红棕色后继续加热沸腾5分钟，静置至恢复室温，置于4℃保存待用。 4.根据权利要求1所述的登革病毒NS1抗原检测试纸条的制备方法，其特征在于：步骤b所述的具体步骤是将胶体金溶液中加入0.2M碳酸钾，混匀调节pH至6.5-8.0，然后加入NS1mAb5，继续搅拌30min，再加入2ml 10%牛血清白蛋白溶液，继续搅拌30min，在4℃转速为8000g的条件下离心30min得到沉淀，沉淀用1ml重悬液复溶。 5.根据权利要求1或3所述的登革病毒NS1抗原检测试纸条的制备方法，其特征在于：步骤b所述重悬液为0.01M磷酸盐缓冲液，每100ml磷酸盐缓冲液包含1g牛血清白蛋白和10g海藻糖、0.05% NaN3，pH 7.0±0.1。 6.根据权利要求1所述的登革病毒NS1抗原检测试纸条的制备方法，其特征在于：步骤c所述的免疫结合垫采用玻璃纤维膜或聚酯纤维膜。 7.根据权利要求1所述的登革病毒NS1抗原检测试纸条的制备方法，其特征在于：步骤c所述结合垫处理液为硼酸-硼砂缓冲体系，每100ml结合垫处理液含0.9g 硼酸、0.6g四硼酸钠、5g海藻糖、0.5g BSA、10mg 阻断剂、0.2% Triton X-100、0.05% NaN3，pH 8.6±0.1。 8.根据权利要求1所述的登革病毒NS1抗原检测试纸条的制备方法，其特征在于：步骤d中，所述的包被缓冲液为Tris缓冲体系，每100ml包被缓冲液含1.21g Tris、0.5g 氯化钠、3g 蔗糖、0.05% NaN3，pH 8.6±0.1。 9.根据权利要求1所述的登革病毒NS1抗原检测试纸条的制备方法，其特征在于：步骤d中，所述检测线工作液浓度为1.0mg/mL；所述质控线工作液浓度为1.5mg/ml。 10.根据权利要求1所述的登革病毒NS1抗原检测试纸条的制备方法，其特征在于：步骤e中所述样品垫采用玻璃纤维膜或聚酯纤维膜。 11.根据权利要求1所述的登革病毒NS1抗原检测试纸条的制备方法，其特征在于：步骤e中所述样品垫处理液为Tris缓冲体系，每100ml样品垫缓冲溶液中含1.21g Tris、0.4g 酪蛋白钠、1% Tween80，pH 8.6±0.1。 12.一种登革病毒NS1抗原检测卡的制备方法，其特征在于：将权利要求1步骤f获得的登革病毒NS1抗原检测试纸条置入塑料外壳中，其中，塑料外壳的加样孔在样品垫上方，塑料外壳的观察窗在检测线T和质控线C上方,加样孔和观察窗上方无遮挡物。 13.一种登革病毒NS1抗原检测试剂盒的制备方法，其特征在于：将权利要求11中获得的登革病毒NS1抗原检测卡装入铝箔袋，与采样吸管、说明书装盒组成登革病毒NS1抗原检测试剂盒。 14.一种登革病毒NS1抗原检测试纸条,试纸条自上而下依次由样品垫（1）、免疫结合垫（2）、硝酸纤维素膜（3）和吸水垫（6）粘贴于聚氯乙烯底板（7）上组成，其中，所述免疫结合垫上包被标记有胶体金的NS1 mAb5，硝酸纤维素膜设有检测线T（4）和质控线C（5），检测线T包被了NS1 mAb6，质控线包被了羊抗鼠IgG多抗。 15.一种登革病毒NS1抗原检测卡，包括装有权利要求14所述试纸条的塑料外壳（8），其中塑料外壳的卡壳上盖上设有加样孔（9）和观察窗（10），加样孔在样品垫上方，观察窗在检测线T和质控线C上方。 16.一种登革病毒NS1抗原检测试剂盒，将装有权利要求15所述检测卡的铝箔袋、采样吸管和说明书装盒得到试剂盒。
所属类别：	发明专利