详情

原文传递一种猪流行性腹泻病毒琼扩抗原及其用于抗体检测的检测方法

专利名称：	一种猪流行性腹泻病毒琼扩抗原及其用于抗体检测的检测方法
摘要：	本发明公开了一种猪流行性腹泻病毒琼扩抗原及其用于抗体检测的检测方法。所述琼扩抗原是将第28代猪流行性腹泻病毒SD株的病毒液接种Vero细胞进行大量增殖，收集病毒培养物，冻融3次，加入聚乙二醇辛基苯基醚处理后，离心取上清，上清经超速离心，获得猪流行性腹泻病毒琼扩抗原。本发明工艺方法简单、科学，生产稳定，成本低廉，制成的猪流行性腹泻病毒琼扩抗原具有敏感性高、特异性强、稳定性好等特点。本发明琼扩抗原用于猪流行性腹泻病毒抗体的检测方法为猪流行性腹泻病毒抗体琼脂扩散试验检测方法。有较高的阳性检出率，且具有实验操作要求低、检测成本低等特点，特别适宜基层兽医检疫检验部门和养殖场使用。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	安徽;34
申请人：	安徽省农业科学院畜牧兽医研究所
发明人：	潘孝成;沈学怀;赵瑞宏;张丹俊;戴银;胡晓苗;候宏艳;周学利
专利状态：	有效
申请日期：	2019-04-03T00:00:00+0800
发布日期：	2019-07-12T00:00:00+0800
申请号：	CN201910265839.0
公开号：	CN110007077A
代理机构：	合肥金安专利事务所(普通合伙企业)
代理人：	金惠贞
分类号：	G01N33/569(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	230031 安徽省合肥市蜀山区农科南路40号
主权项：	1.一种猪流行性腹泻病毒琼扩抗原，其特征在于：由下述方法得到：（1）1mL第28代猪流行性腹泻病毒的病毒液，其TCID50值为10-7.5，接种到25cm2细胞培养瓶中已长成单层的VERO细胞上，置37℃、5%CO2培养箱中培养72小时，接毒VERO细胞出现典型细胞病变，且开始聚集脱落，将细胞培养瓶置-20℃以下至完全结冻，取出室温条件下融化，如此反复冻融3次，收集病毒培养物，所述病毒培养物包含细胞和培养液；所述第28代猪流行性腹泻病毒SD株于 2019 年 3 月29日保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏地址：中国，武汉，武汉大学；其保藏名称为流行性腹泻病毒SD株，保藏编号为：CCTCC NO: V201915；（2）将病毒培养物按终浓度2‰的量加入甲醛混合均匀，于37℃摇床灭活24小时；（3）在冻融3次且灭活的病毒培养物中，按病毒培养物体积1/20的量加入聚乙二醇辛基苯基醚，室温振荡20分钟，转速6000r/min、温度4℃条件下，高速离心20min，收集上清液；（4）取上清液在转速45000r/min、温度4℃条件下，超速离心120min；弃去上清液，沉淀用0.01mol/L pH值7.4的PBS缓冲液充分溶解，PBS缓冲液的用量为病毒培养物体积1/15的量，既得猪流行性腹泻病毒琼扩抗原， -20℃分装保存。 2.根据权利要求1所述的一种猪流行性腹泻病毒琼扩抗原用于猪流行性腹泻病毒抗体的检测方法，其特征在于：所述猪流行性腹泻病毒抗体检测方法为猪流行性腹泻病毒抗体琼脂扩散试验检测方法。 3.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于操作步骤如下：（1）用浓度0.01mol/L、pH值为7.4的PBS缓冲液配制浓度1%的琼脂糖凝胶，制备琼扩平板，琼脂糖凝胶厚度为5～6mm之间，用七孔梅花打孔器打孔；（2）将琼扩抗原加入到七孔中的中间孔，将待测抗体做等比稀释，稀释倍数分别为2-1、2-2、2-3、2-4、2-5、2-6，依次加入到周围6孔中，加入琼扩抗原和待测抗体的量均为30µL/孔，将琼扩平板于37℃温盒中反应24h，读取琼扩抗体效价；琼扩抗体效价≥1:2、有沉淀线出现的判为猪流行腹泻病毒抗体阳性，无沉淀线出现的判为阴性。
所属类别：	发明专利