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原文传递猪流行性腹泻病毒S2蛋白间接ELISA抗体检测方法及其试剂盒

专利名称：	猪流行性腹泻病毒S2蛋白间接ELISA抗体检测方法及其试剂盒
摘要：	本发明公开了一种猪流行性腹泻病毒S2蛋白间接ELISA抗体检测试剂盒，包括包被酶标板，包被酶标板以重组S2蛋白作为包被抗原。据此，还建立相应ELISA检测方法并进行临床应用，为检测PEDV抗体提供了一种有实际价值的诊断工具。应用本发明可建立识别猪流行性腹泻病毒感染产生的抗体的方法，具有较高的特异性与敏感性，该法操作简单，耗时短，成本低，可大批量检测，对该病的防控与净化具有重要意义。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	广西;45
申请人：	广西壮族自治区兽医研究所
发明人：	秦毅斌;闭炳芬;段群棚;蒋冬福;卢敬专;苏乾莲;赵武;刘磊;卢冰霞;何颖;陈忠伟;周英宁;李斌;梁家幸
专利状态：	有效
申请日期：	2019-02-26T00:00:00+0800
发布日期：	2019-06-14T00:00:00+0800
申请号：	CN201910140122.3
公开号：	CN109884314A
代理机构：	广西南宁公平知识产权代理有限公司
代理人：	杨立华
分类号：	G01N33/68(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	530001 广西壮族自治区南宁市西乡塘区友爱北路51号
主权项：	1.一种猪流行性腹泻病毒S2蛋白间接ELISA抗体检测试剂盒，包括包被酶标板，其特征在于：所述包被酶标板以重组S2蛋白作为包被抗原。 2.根据权利要求1所述的ELISA检测试剂盒，其特征在于：所述重组S2蛋白由序列表SEQ.ID.No.1的基因碱基序列编码或者具有SEQ.ID.No.2的氨基酸序列。 3.根据权利要求2所述的ELISA检测试剂盒，其特征在于还包括阴性血清、阳性血清、HRP标记的山羊抗猪IgG抗体、洗涤液、稀释液、包被液、封闭液、底物液、终止液；所述洗涤液为PBS+0.05％Tween-20；所述稀释液为PBS+2％脱脂奶粉+0.05％Tween-20；所述包被液为采用0.05M PH9.6Na2CO3-NaHCO3缓冲液；所述底物液为单组份TMB底物显色液；所述封闭液为PBS+5％脱脂奶粉；所述终止液为2M H2SO4溶液。 4.一种猪流行性腹泻病毒S2蛋白间接ELISA抗体检测方法，其特征在于按以下操作进行：包被抗原：将重组S2蛋白以包被液稀释后加入酶标板中包被，100μL/孔，得包被酶标板；洗涤：弃去包被液并用洗涤液洗涤；封闭：每孔加入250μL封闭液，37℃封闭，弃去封闭液洗涤；孵育一抗：将猪血清与稀释液混匀，100μL/孔，37℃孵育，弃去并洗涤；孵育二抗：将HRP标记的山羊抗猪IgG抗体与稀释液混匀，100μL/孔，37℃孵育，弃去并洗涤；显色读数：以100μL/孔加入底物液，室温显色反应后加入终止液，酶标仪读取OD450值。 5.根据权利要求4所述的ELISA检测方法，其特征在于：所述重组S2蛋白以包被液稀释至8μg/mL，所述HRP标记的山羊抗猪IgG抗体的稀释度为1:4000。 6.根据权利要求5所述的ELISA检测方法，其特征在于：所述包被为4℃包被过夜加37℃包被2h。 7.根据权利要求6所述的ELISA检测方法，其特征在于：所述封闭时间为120分钟。 8.根据权利要求7所述的ELISA检测方法，其特征在于：所述猪血清的稀释度为1:40，孵育时间为120min。 9.根据权利要求8所述的ELISA检测方法，其特征在于：所述孵育二抗的反应时间为45分钟。 10.根据权利要求9所述的ELISA检测方法，其特征在于：所述显色反应时间为15分钟。
所属类别：	发明专利