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原文传递一种快速定量分析48种氨基酸的方法

专利名称：	一种快速定量分析48种氨基酸的方法
摘要：	本发明公开了一种快速定量分析48种氨基酸的方法。本发明提供了一种衍生化HPLC‑MS/MS法的定量分析检测氨基酸含量的衍生化试剂组合，包括衍生化试剂A和衍生化试剂B；其中，衍生化试剂A为正丙醇和3‑甲基吡啶的混合溶液，衍生化试剂B为的二氯甲烷、氯甲酰丙酯和异辛烷的混合溶液。并进一步建立了基于该衍生化方法的稳定同位素内标液组合、样品前处理方法和液相色谱‑串联质谱方法。本发明提出的衍生化试剂衍生化效率高，试剂毒性低；方法所需样品量少、处理简单、快速、重复性好，检测成本低；实现了仅用了22min对48种氨基酸的绝对定量分析，大大缩短了分析时间，提高了检测通量；具有很大的推广应用价值。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	广东;44
申请人：	广州市妇女儿童医疗中心
发明人：	彭敏芝;刘丽
专利状态：	有效
申请日期：	2019-02-15T00:00:00+0800
发布日期：	2019-07-16T00:00:00+0800
申请号：	CN201910117974.0
公开号：	CN110018266A
代理机构：	广州粤高专利商标代理有限公司
代理人：	冯振宁
分类号：	G01N30/89(2006.01);G;G01;G01N;G01N30
申请人地址：	510145 广东省广州市越秀区人民中路318号
主权项：	1.一种HPLC-MS/MS法分析检测氨基酸的衍生化试剂组合，其特征在于，包括衍生化试剂A和衍生化试剂B；其中，衍生化试剂A为正丙醇和3-甲基吡啶的混合溶液，衍生化试剂B为的二氯甲烷、氯甲酰丙酯和异辛烷的混合溶液。 2.一种13C3-标记的氨基酸酯化物的制备方法，其特征在于，待标记氨基酸溶液依次加入权利要求1所述衍生化试剂A和权利要求1所述衍生化试剂B混合，再加入中性盐/过饱和的中性盐溶液混匀，得到混合溶液，用乙酸乙酯对混合溶液进行萃取得到萃取液，萃取液以乙酸乙酯稀释，即得内标液B，氨基酸混合液、13C3-丙醇、3-甲基吡啶、衍生化试剂B的体积比为：20～60：4～10：1～4：4～12。 3.一种衍生化HPLC-MS/MS法检测氨基酸含量的内标液组合，其特征在于，包括内标液A和内标液B；内标液A为D3-蛋氨酸和D4-胱硫醚的水溶液，D3-蛋氨酸的浓度为2～10μmol/L，D4-胱硫醚的浓度为0.5～2μmol/L；内标液B为氨基酸的13C3-标记的氨基酸酯化物，所述氨基酸为甘氨酸、丙氨酸、β-丙氨酸、肌氨酸、α-氨基丁酸、γ-氨基丁酸、β-氨基异丁酸、丝氨酸、脯氨酸、缬氨酸、苏氨酸、羟脯氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、1-甲基组氨酸、3-甲基组氨酸、苯丙氨酸、瓜氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、精氨酸、α-氨基己二酸、鸟氨酸、组氨酸、赖氨酸、酪氨酸、同型精氨酸、同型瓜氨酸、还原型谷胱甘肽、同型半胱氨酸、半胱氨酸、焦谷氨酸、吡哌酸和δ-氨基戊酮酸的一种或几种，优选地，采用权利要求2所述方法制备13C3-标记的氨基酸酯化物。 4.一种衍生化HPLC-MS/MS法定量分析氨基酸含量的样品前处理的方法，其特征在于，包括以下步骤： S1. 将样品以水稀释液，依次加入权利要求2所述内标液A和三羟丙基膦溶液，混合反应，得到混合溶液1； S2. 将混合溶液1、权利要求1所述衍生化试剂A和权利要求1所述衍生化试剂B迅速混合，进行衍生化反应，得到混合溶液2； S3. 向混合溶液2加入中性盐/过饱和的中性盐溶液和权利要求2所述内标液B，得到混合溶液3； S4. 用乙酸乙酯萃取混合溶液3，干燥萃取液； S5. 甲醇水混合液复溶干燥后的萃取液，过滤膜；其中，混合溶液1中三羟丙基膦的浓度不低于0.5mg/mL；样品稀释液、权利要求2所述内标液A、权利要求1所述衍生化试剂A、权利要求1所述衍生化试剂B和权利要求2所述内标液B的体积比为25～50：10～20：20～40：12～25：25～50；甲醇水混合液中甲醇和水的体积比为4～5：6～5；甲醇水混合液的体积是样品稀释液体积的2～4倍。 5.一种衍生化HPLC-MS/MS法的分析检测氨基酸的方法，其特征在于，使用权利要求4所述方法进行样品前处理。 6.根据权利要求4所述方法，其特征在于，液相色谱采用反向C18色谱柱，柱温为25～50℃，反向C18色谱柱的规格为150×3.0mm i.d., 3.0μm；优选地，流动相A为1～10mmol/L甲酸铵水溶液；流动相B为乙腈、甲醇和水的混合液，以体积计算，流动相B含有50～75%的乙腈、40～20%的甲醇和5～10%的水；流动相流速为0.3～0.5mL/min；梯度洗脱程序为：0～1.0min 40%流动相B，第1.0～7.0 min流动相B逐渐升至60%，7.0～16.0 min 流动相B逐渐升至70%，18.0～20 min流动相B恒定为100%，20.1～22.0 min流动相B恒定为40%；进样体积2～20μL。 7.根据权利要求6 所述方法，其特征在于，乙醇胺的采集参数：多反应监测定量离子对1为148.1/ 62.1(m/z)、去簇电压36 V、射入电压6 V、碰撞能16 V，多反应监测定量离子对2为148.1/ 62.1(m/z)、去簇电压36 V、射入电压6 V、碰撞能15 V，同位素内标监测离子对175.2/84.1 (m/z)、去簇电压35 V、射入电压7 V、碰撞能6 V；焦谷氨酸的采集参数：多反应监测定量离子对1为172.2/84.1 (m/z)、去簇电压35 V、射入电压7 V、碰撞能24 V，多反应监测定量离子对2为172.2/130.1 (m/z)、去簇电压40 V、射入电压6 V、碰撞能17 V，同位素内标监测离子对175.2/84.1 (m/z)、去簇电压35 V、射入电压7 V、碰撞能24 V；精氨酸的采集参数：多反应监测定量离子对1为303.2/70.1 (m/z)、去簇电压54 V、射入电压7 V、碰撞能57 V，多反应监测定量离子对2为303.2/156.2 (m/z)、去簇电压50 V、射入电压5 V、碰撞能30 V，同位素内标监测离子对306.3/70.1 (m/z)、去簇电压54 V、射入电压7 V、碰撞能57 V；同型精氨酸的采集参数：多反应监测定量离子对1为317.2/84.1 (m/z)、去簇电压56V、射入电压4 V、碰撞能50 V，多反应监测定量离子对2为317.2/126.1 (m/z)、去簇电压56V、射入电压4 V、碰撞能35 V，同位素内标监测离子对320.3/84.1 (m/z)、去簇电压56 V、射入电压4 V、碰撞能50 V；谷氨酰胺的采集参数：多反应监测定量离子对1为275.2/172.2 (m/z)、去簇电压38 V、射入电压4 V、碰撞能20 V，多反应监测定量离子对2为275.2/84.1 (m/z)、去簇电压38 V、射入电压5 V、碰撞能30 V，同位素内标监测离子对278.3/175.2 (m/z)、去簇电压38 V、射入电压4 V、碰撞能20 V；瓜氨酸的采集参数：多反应监测定量离子对1为304.2/156.1 (m/z)、去簇电压33 V、射入电压10 V、碰撞能24 V，多反应监测定量离子对2为304.2/287.2 (m/z)、去簇电压32 V、射入电压11 V、碰撞能14 V，同位素内标监测离子对307.3/156.1 (m/z)、去簇电压33 V、射入电压10 V、碰撞能24 V；甘氨酰甘氨酸的采集参数：多反应监测定量离子对1为261.2/102.0 (m/z)、去簇电压40 V、射入电压5 V、碰撞能21 V，多反应监测定量离子对2为261.2/144.1 (m/z)、去簇电压40 V、射入电压5 V、碰撞能21 V，同位素内标监测离子对264.3/102.0 (m/z)、去簇电压40V、射入电压6 V、碰撞能16 V； 3-甲基-组氨酸的采集参数：多反应监测定量离子对1为298.2/96.1 (m/z)、去簇电压50 V、射入电压4 V、碰撞能50 V，多反应监测定量离子对2为298.2/256.2 (m/z)、去簇电压50 V、射入电压5 V、碰撞能27 V，同位素内标监测离子对301.3/96.1 (m/z)、去簇电压50V、射入电压4 V、碰撞能50 V；丝氨酸的采集参数：多反应监测定量离子对1为234.2/146.1 (m/z)、去簇电压37 V、射入电压6 V、碰撞能17 V，多反应监测定量离子对2为234.2/174.1 (m/z)、去簇电压35 V、射入电压5 V、碰撞能14 V，同位素内标监测离子对237.2/146.1 (m/z)、去簇电压37 V、射入电压6 V、碰撞能17 V；同型瓜氨酸的采集参数：多反应监测定量离子对1为318.2/170.2 (m/z)、去簇电压41V、射入电压4 V、碰撞能25 V，多反应监测定量离子对2为318.2/127.1 (m/z)、去簇电压41V、射入电压3 V、碰撞能30 V，同位素内标监测离子对321.3/170.2 (m/z)、去簇电压41 V、射入电压4 V、碰撞能25 V；羟脯氨酸的采集参数：多反应监测定量离子对1为260.2/172.2 (m/z)、去簇电压40 V、射入电压5 V、碰撞能19 V，多反应监测定量离子对2为260.2/86.1 (m/z)、去簇电压38 V、射入电压6 V、碰撞能32 V，同位素内标监测离子对263.3/172.1 (m/z)、去簇电压40 V、射入电压5 V、碰撞能19 V； 1-甲基-组氨酸的采集参数：多反应监测定量离子对1为298.2/124.1 (m/z)、去簇电压50 V、射入电压4 V、碰撞能38 V，多反应监测定量离子对2为298.2/210.1 (m/z)、去簇电压50 V、射入电压4 V、碰撞能25 V，同位素内标监测离子对301.2/124.1 (m/z)、去簇电压50V、射入电压4 V、碰撞能38 V； δ-羟赖氨酸的采集参数：多反应监测定量离子对1为334.2/125.1 (m/z)、去簇电压48V、射入电压4 V、碰撞能39 V，多反应监测定量离子对2为334.2/125.1 (m/z)、去簇电压48V、射入电压4 V、碰撞能61 V，同位素内标监测离子对321.3/170.2 (m/z)、去簇电压41 V、射入电压4 V、碰撞能25 V； N-乙酰天冬氨酸的采集参数：多反应监测定量离子对1为260.2/130.1 (m/z)、去簇电压40 V、射入电压4 V、碰撞能25 V，多反应监测定量离子对2为260.2/172.2 (m/z)、去簇电压40 V、射入电压4 V、碰撞能25 V，同位素内标监测离子对260.2/172.2 (m/z)、去簇电压37 V、射入电压5 V、碰撞能18 V；苏氨酸的采集参数：多反应监测定量离子对1为248.2/74.1 (m/z)、去簇电压39 V、射入电压6 V、碰撞能31 V，多反应监测定量离子对2为248.2/160.2 (m/z)、去簇电压39 V、射入电压5 V、碰撞能16 V，同位素内标监测离子对251.3/74.1 (m/z)、去簇电压39 V、射入电压6 V、碰撞能31 V；甘氨酰脯氨酸的采集参数：多反应监测定量离子对1为301.2/158.2 (m/z)、去簇电压42 V、射入电压3.5 V、碰撞能21 V，多反应监测定量离子对2为301.2/70.0 (m/z)、去簇电压45 V、射入电压4.5 V、碰撞能45 V，同位素内标监测离子对304.3/161.2 (m/z)、去簇电压42 V、射入电压3.5 V、碰撞能21 V；甘氨酸的采集参数：多反应监测定量离子对1为204.2/102.0 (m/z)、去簇电压45 V、射入电压6 V、碰撞能16 V，多反应监测定量离子对2为204.2/118.1 (m/z)、去簇电压45 V、射入电压6 V、碰撞能16 V，同位素内标监测离子对207.2/102.0 (m/z)、去簇电压45 V、射入电压6 V、碰撞能16 V；天冬酰胺的采集参数：多反应监测定量离子对1为243.2/157.1 (m/z)、去簇电压45 V、射入电压3.5 V、碰撞能14 V，多反应监测定量离子对2为243.2/115.0 (m/z)、去簇电压44V、射入电压3.5 V、碰撞能19 V，同位素内标监测离子对246.2/160.2 (m/z)、去簇电压45V、射入电压3.5 V、碰撞能14 V； δ-氨基戊酮酸的采集参数：多反应监测定量离子对1为260.2/158.1 (m/z)、去簇电压41 V、射入电压5 V、碰撞能18 V，多反应监测定量离子对2为260.2/200.1 (m/z)、去簇电压41 V、射入电压6 V、碰撞能12 V，同位素内标监测离子对263.3/158.1 (m/z)、去簇电压41V、射入电压5 V、碰撞能18 V； β-丙氨酸的采集参数：多反应监测定量离子对1为218.2/116.1 (m/z)、去簇电压39 V、射入电压5 V、碰撞能19 V，多反应监测定量离子对2为218.2/158.1 (m/z)、去簇电压39 V、射入电压6 V、碰撞能13 V，同位素内标监测离子对221.3/116.1 (m/z)、去簇电压39 V、射入电压5 V、碰撞能19 V；丙氨酸的采集参数：多反应监测定量离子对1为218.2/130.1 (m/z)、去簇电压40 V、射入电压5 V、碰撞能17 V，多反应监测定量离子对2为218.2/158.1 (m/z)、去簇电压39 V、射入电压6 V、碰撞能13 V，同位素内标监测离子对221.2/130.1 (m/z)、去簇电压40 V、射入电压5 V、碰撞能17 V； γ-氨基丁酸的采集参数：多反应监测定量离子对1为232.2/172.2 (m/z)、去簇电压36V、射入电压4 V、碰撞能13 V，多反应监测定量离子对2为232.2/86.1 (m/z)、去簇电压32V、射入电压5 V、碰撞能24 V，同位素内标监测离子对235.3/172.1 (m/z)、去簇电压36 V、射入电压4 V、碰撞能13 V；肌氨酸的采集参数：多反应监测定量离子对1为218.2/116.0 (m/z)、去簇电压37 V、射入电压5 V、碰撞能16 V，多反应监测定量离子对2为218.2/88.1 (m/z)、去簇电压37 V、射入电压7 V、碰撞能24 V，同位素内标监测离子对221.3/116.0 (m/z)、去簇电压37 V、射入电压5 V、碰撞能16 V； β-氨基异丁酸的采集参数：多反应监测定量离子对1为232.2/130.1 (m/z)、去簇电压32 V、射入电压5 V、碰撞能19 V，多反应监测定量离子对2为232.2/172.2 (m/z)、去簇电压36 V、射入电压5 V、碰撞能14 V，同位素内标监测离子对235.3/130.1 (m/z)、去簇电压32V、射入电压5 V、碰撞能19 V； α-氨基丁酸的采集参数：多反应监测定量离子对1为232.2/144.1 (m/z)、去簇电压30V、射入电压8 V、碰撞能16 V，多反应监测定量离子对2为232.2/172.1 (m/z)、去簇电压30V、射入电压6 V、碰撞能11 V，同位素内标监测离子对235.3/144.1 (m/z)、去簇电压30 V、射入电压8 V、碰撞能16 V；脯氨酸的采集参数：多反应监测定量离子对1为244.2/156.1 (m/z)、去簇电压42 V、射入电压4 V、碰撞能18 V，多反应监测定量离子对2为244.2/70.1 (m/z)、去簇电压38 V、射入电压6 V、碰撞能40 V，同位素内标监测离子对247.3/156.1 (m/z)、去簇电压42 V、射入电压4 V、碰撞能18 V；鸟氨酸的采集参数：多反应监测定量离子对1为347.2/287.2 (m/z)、去簇电压47 V、射入电压3.5 V、碰撞能14 V，多反应监测定量离子对2为347.2/156.1 (m/z)、去簇电压47 V、射入电压3.5 V、碰撞能26 V，同位素内标监测离子对350.3/290.2 (m/z)、去簇电压47 V、射入电压3.5 V、碰撞能14 V；甲硫氨酸的采集参数：多反应监测定量离子对1为278.1/190.2 (m/z)、去簇电压41 V、射入电压4.5 V、碰撞能17 V，多反应监测定量离子对2为278.1/142.1 (m/z)、去簇电压41V、射入电压4.5 V、碰撞能23 V，同位素内标监测离子对281.2/190.2 (m/z)、去簇电压41V、射入电压4.5 V、碰撞能17 V；组氨酸的采集参数：多反应监测定量离子对1为370.2/196.2 (m/z)、去簇电压40 V、射入电压6 V、碰撞能27 V，多反应监测定量离子对2为370.2/284.2 (m/z)、去簇电压48 V、射入电压6 V、碰撞能23 V，同位素内标监测离子对373.2/196.2 (m/z)、去簇电压40 V、射入电压6 V、碰撞能27 V；赖氨酸的采集参数：多反应监测定量离子对1为361.3/170.2 (m/z)、去簇电压46 V、射入电压6 V、碰撞能26 V，多反应监测定量离子对2为361.3/301.2 (m/z)、去簇电压48 V、射入电压6 V、碰撞能15 V，同位素内标监测离子对364.4/170.1 (m/z)、去簇电压46 V、射入电压6 V、碰撞能26 V；酵母氨酸的采集参数：多反应监测定量离子对1为429.3/369.2 (m/z)、去簇电压36 V、射入电压8 V、碰撞能19 V，多反应监测定量离子对2为429.3/170.2 (m/z)、去簇电压45 V、射入电压6 V、碰撞能29 V，同位素内标监测离子对435.4/375.4 (m/z)、去簇电压36 V、射入电压8 V、碰撞能19 V；缬氨酸的采集参数：多反应监测定量离子对1为246.3/158.2 (m/z)、去簇电压35 V、射入电压6 V、碰撞能15 V，多反应监测定量离子对2为246.3/116.1 (m/z)、去簇电压35 V、射入电压9 V、碰撞能25 V，同位素内标监测离子对249.3/158.2 (m/z)、去簇电压35 V、射入电压6 V、碰撞能15 V；天冬氨酸的采集参数：多反应监测定量离子对1为304.3/216.2 (m/z)、去簇电压40 V、射入电压5 V、碰撞能17 V，多反应监测定量离子对2为304.3/130.1 (m/z)、去簇电压40 V、射入电压5 V、碰撞能27 V，同位素内标监测离子对310.4/219.2 (m/z)、去簇电压40 V、射入电压5 V、碰撞能17 V；谷氨酸的采集参数：多反应监测定量离子对1为318.2/172.2 (m/z)、去簇电压44 V、射入电压5.5 V、碰撞能21 V，多反应监测定量离子对2为318.2/84.1 (m/z)、去簇电压44 V、射入电压5 V、碰撞能38 V，同位素内标监测离子对324.3/175.2 (m/z)、去簇电压44 V、射入电压5.5 V、碰撞能21 V；色氨酸的采集参数：多反应监测定量离子对1为333.2/245.2 (m/z)、去簇电压45 V、射入电压5.5 V、碰撞能22 V，多反应监测定量离子对2为333.2/273.1 (m/z)、去簇电压45 V、射入电压6 V、碰撞能16 V，同位素内标监测离子对336.3/245.1 (m/z)、去簇电压45 V、射入电压5.5 V、碰撞能22 V； γ-羧基谷氨酸的采集参数：多反应监测定量离子对1为344.2/258.2 (m/z)、去簇电压42 V、射入电压4.5 V、碰撞能15 V，多反应监测定量离子对2为344.2/170.1 (m/z)、去簇电压42 V、射入电压4.5 V、碰撞能26 V，同位素内标监测离子对350.3/264.3 (m/z)、去簇电压42 V、射入电压4.5 V、碰撞能15 V；总的还原型谷胱甘肽的采集参数：多反应监测定量离子对1为564.3/162.1 (m/z)、去簇电压55 V、射入电压6 V、碰撞能30 V，多反应监测定量离子对2为564.3/447.2 (m/z)、去簇电压55 V、射入电压7 V、碰撞能19 V，同位素内标监测离子对570.4/162.1 (m/z)、去簇电压55 V、射入电压6 V、碰撞能30 V； α-氨基己二酸的采集参数：多反应监测定量离子对1为332.2/98.1 (m/z)、去簇电压35V、射入电压5.5 V、碰撞能37 V，多反应监测定量离子对2为332.2/244.2 (m/z)、去簇电压35 V、射入电压4 V、碰撞能18 V，同位素内标监测离子对338.3/98.1 (m/z)、去簇电压35V、射入电压5.5 V、碰撞能37 V；苯丙氨酸的采集参数：多反应监测定量离子对1为294.2/206.1 (m/z)、去簇电压50 V、射入电压5 V、碰撞能17 V，多反应监测定量离子对2为294.2/120.1 (m/z)、去簇电压50 V、射入电压4 V、碰撞能35 V，同位素内标监测离子对297.3/206.1 (m/z)、去簇电压50 V、射入电压5 V、碰撞能17 V；亮氨酸的采集参数：多反应监测定量离子对1为260.2/172.2 (m/z)、去簇电压45 V、射入电压6.5 V、碰撞能18 V，多反应监测定量离子对2为260.2/86.1 (m/z)、去簇电压45 V、射入电压7 V、碰撞能28 V，同位素内标监测离子对263.3/172.2 (m/z)、去簇电压45 V、射入电压6.5 V、碰撞能18 V；异亮氨酸的采集参数：多反应监测定量离子对1为260.2/130.1 (m/z)、去簇电压40 V、射入电压6 V、碰撞能24 V，多反应监测定量离子对2为260.2/172.2 (m/z)、去簇电压43 V、射入电压5 V、碰撞能16 V，同位素内标监测离子对263.3/130.1 (m/z)、去簇电压40 V、射入电压6 V、碰撞能24 V；吡哌酸的采集参数：多反应监测定量离子对1为258.3/128.1 (m/z)、去簇电压38 V、射入电压4 V、碰撞能29 V，多反应监测定量离子对2为258.3/170.2 (m/z)、去簇电压38 V、射入电压5 V、碰撞能19 V，同位素内标监测离子对261.3/128.1 (m/z)、去簇电压38 V、射入电压4 V、碰撞能29 V；精氨琥珀酸的采集参数：多反应监测定量离子对1为529.3/469.3 (m/z)、去簇电压47V、射入电压6 V、碰撞能23 V，多反应监测定量离子对2为529.3/156.1 (m/z)、去簇电压50V、射入电压6 V、碰撞能43 V，同位素内标监测离子对535.5/475.4 (m/z)、去簇电压47 V、射入电压6 V、碰撞能23 V；总的半胱氨酸的采集参数：多反应监测定量离子对1为336.2/190.1 (m/z)、去簇电压42 V、射入电压5.5 V、碰撞能18 V，多反应监测定量离子对2为336.2/248.2 (m/z)、去簇电压48 V、射入电压6 V、碰撞能17 V，同位素内标监测离子对339.3/193.2 (m/z)、去簇电压42 V、射入电压5.5 V、碰撞能18 V；胱硫醚的采集参数：多反应监测定量离子对1为479.3/230.2 (m/z)、去簇电压45 V、射入电压7 V、碰撞能23 V，多反应监测定量离子对2为479.3/142.1 (m/z)、去簇电压45 V、射入电压7 V、碰撞能28 V，同位素内标监测离子对485.4/233.3 (m/z)、去簇电压45 V、射入电压7 V、碰撞能23 V；总的同型半胱氨酸的采集参数：多反应监测定量离子对1为350.2/142.1 (m/z)、去簇电压46 V、射入电压5.5 V、碰撞能24 V，多反应监测定量离子对2为350.2/204.1 (m/z)、去簇电压46 V、射入电压5.5 V、碰撞能24 V，同位素内标监测离子对353.3/142.1 (m/z)、去簇电压48 V、射入电压5.5 V、碰撞能18 V；酪氨酸的采集参数：多反应监测定量离子对1为413.3/136.1 (m/z)、去簇电压31 V、射入电压3.5 V、碰撞能45 V，多反应监测定量离子对2为413.3/222.1 (m/z)、去簇电压31 V、射入电压3.5 V、碰撞能33 V，同位素内标监测离子对416.3/136.1 (m/z)、去簇电压31 V、射入电压3.5 V、碰撞能45 V；犬尿氨酸的采集参数：多反应监测定量离子对1为423.2/146.1 (m/z)、去簇电压50 V、射入电压4.5 V、碰撞能42 V，多反应监测定量离子对2为423.2/260.1 (m/z)、去簇电压50V、射入电压4.5 V、碰撞能21 V，同位素内标监测离子对426.3/146.1 (m/z)、去簇电压50V、射入电压4.5 V、碰撞能42 V。 8.一种衍生化HPLC-MS/MS法检测氨基酸含量的试剂盒，其特征在于，包括权利要求1所述衍生化试剂组合、权利要求3所述内标液组合和待测氨基酸的标准品；优选地，待测氨基酸的标准品，包括标准品1、标准品2和标准品3，其中，标准品1为：乙醇胺、甘氨酸、丙氨酸、β-丙氨酸、肌氨酸、α-氨基丁酸、γ-氨基丁酸、β-氨基异丁酸、丝氨酸、脯氨酸、缬氨酸、苏氨酸、羟脯氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、甲硫氨酸、1-甲基组氨酸、3-甲基组氨酸、苯丙氨酸、瓜氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、精氨酸、α-氨基己二酸、胱硫醚、鸟氨酸、组氨酸、赖氨酸、酪氨酸、同型精氨酸、同型瓜氨酸、5-羟基赖氨酸、还原型谷胱甘肽、同型半胱氨酸、半胱氨酸、焦谷氨酸、吡哌酸、δ-氨基戊酮酸、γ-羧基谷氨酸、犬尿氨酸、酵母氨酸和精氨酰琥珀酸的一种或几种的标准品溶液；标准品2为：天冬酰胺、N-乙酰天冬氨酸、甘氨酰甘氨酸、谷氨酰胺和甘氨酰脯氨酸中的一种或几种的标准品溶液；标准品3为：色氨酸的标准品溶液。 9.权利要求1所述衍生化试剂组合、权利要求2所述制备方法、权利要求3所述内标液组合、权利要求4所述样品前处理方法、权利要求5所述方法或权利要求8所述试剂盒任一在检测氨基酸中的应用。 10.权利要求1所述衍生化试剂组合、权利要求2所述制备方法或权利要求3所述内标液组合任一在制备衍生化HPLC-MS/MS法检测氨基酸含量的试剂盒种的应用。
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