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原文传递二茂铁基共价有机框架修饰电极的制备方法及其电化学检测肌钙蛋白的方法

专利名称：	二茂铁基共价有机框架修饰电极的制备方法及其电化学检测肌钙蛋白的方法
摘要：	二茂铁基共价有机框架修饰电极的制备方法及其电化学检测肌钙蛋白的方法，本专利通过利用纳米材料高比表面积、高导电性、好的生物相容性等优点，结合免疫化学、电化学与计算机等技术，在检测限等分析评价指标上取得了很好的效果。在心脏标志物的快速、准确、高效分析及设备微型化发展上显示出了其它方法无可比拟的优势；同时电化学适配体传感器具有检测速度快，灵敏度高，特异性强，简单便携，成本效益相对较低和微型化等特点，在肌钙蛋白检测领域展现出较好的应用前景。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	福建;35
申请人：	闽南师范大学
发明人：	高凤;汪庆祥;宋娟
专利状态：	有效
申请日期：	2019-04-25T00:00:00+0800
发布日期：	2019-07-23T00:00:00+0800
申请号：	CN201910339712.9
公开号：	CN110044987A
代理机构：	厦门创象知识产权代理有限公司
代理人：	吴慧敏
分类号：	G01N27/327(2006.01);G;G01;G01N;G01N27
申请人地址：	363000 福建省漳州市县前直街36号
主权项：	1.二茂铁基共价有机框架修饰电极的制备方法，其特征在于：步骤一：将1～20mmol/L 2,3,6,7,10,11-六羟基三亚苯水溶液和1～20mmol/L硼酸二茂铁的水溶液按照体积比1:3混合，15～50℃下恒温反应8～24h，得到的混合液标记为混合液A；步骤二：COF修饰电极制备：将预处理过的金电极先滴涂3～20μL浓度为1～20mmol/L对巯基苯硼酸乙醇溶液，室温下晾干，重复滴涂、晾干3～6次后，用蒸馏水淋洗；再将电极上滴涂3～20μL混合液A，室温下晾干，重复滴涂、晾干3～6次，蒸馏水淋洗，得到共价有机框架/金电极，记为修饰电极1；步骤三：然后将修饰电极1滴涂3～20μL浓度为1～20 mmol/L的MCH，室温下晾干，重复滴涂3～6次，蒸馏水淋洗，得到修饰电极2；步骤四：滴涂5～20μL浓度为1～1000nmol/L的Tro4单链探针于修饰电极2上；并在15～50℃恒温反应30～90min，然后，在混合磷酸盐缓冲液中浸泡1～20min，得到二茂铁基共价有机框架修饰电极。 2.如权利要求1所述的二茂铁基共价有机框架修饰电极的制备方法，其特征在于：步骤二中所述金电极的预处理工艺为：金电极依次用粒径为1.0μm、0.3μm和0.05μm的铝粉抛光，然后将金电极放置于去离子水、乙醇和水体积比为1:1的乙醇溶液、去离子水中各超声5min，再将金电极浸泡在H2SO4:H2O2体积比为7:3的溶液中活化20min，活化后将金电极放置在0.5M H2SO4溶液中用循环伏安法扫描，扫描区间为-0.2～+1.5V，扫速100mV/s，扫描50圈，最后用大量水冲洗电极至中性，用N2吹干金电极表面。 3.如权利要求1所述的二茂铁基共价有机框架修饰电极的制备方法，其特征在于：所述Tro4单链探针与目标肌钙蛋白特异性结合，其序列为: 5’-CGTG CAGT ACGC CAAC CTTTCTCA TGCG CTGC CCCT CTTA-3’。 4.如权利要求1所述的二茂铁基共价有机框架修饰电极的制备方法，其特征在于：步骤四中修饰电极2滴涂Tro4单链探针后，随后的恒温反应的反应条件为在12μL对巯基苯硼酸、12μL硼酸二茂铁-六羟基三亚苯混合液中富集60min。 5.如权利要求1至4任一项制备方法所得二茂铁基共价有机框架修饰电极的电化学检测肌钙蛋白的方法，其特征在于：步骤一：将所得二茂铁基共价有机框架修饰电极用超纯水淋洗，在某一浓度肌钙蛋白富集30～90分钟后，在混合磷酸盐缓冲液中测得的差分脉冲曲线；步骤二：将肌钙蛋白浓度依次递增，得到多个差分脉冲曲线，将多个差分脉冲曲线的峰电流Ip与对应的肌钙蛋白的浓度作图，得出差分脉冲曲线峰电流Ip与肌钙蛋白浓度的线性关系；步骤三：检测测试样时，测得相同条件下的差分脉冲曲线的峰电流Ip，利用步骤二所得线性关系定量分析测试样中的肌钙蛋白含量。 6.如权利要求5所述的二茂铁基共价有机框架修饰电极的电化学检测肌钙蛋白的方法，其特征在于：将二茂铁基共价有机框架修饰电极用超纯水淋洗，加所需测含量的肌钙蛋白富集30～90分钟后，在混合磷酸盐缓冲液中测得的差分脉冲曲线，当肌钙蛋白浓度在100fg/mL～10ng/mL的浓度范围内时，其差分脉冲曲线的峰电流Ip与肌钙蛋白浓度对数lgC肌钙蛋白呈良好的线性关系，线性回归方程为Ip(10-9A)=-2.60-0.081lg(C肌钙蛋白/g/mL)，相关性系数为r=0.997，能在此浓度范围内对肌钙蛋白进行定量分析。 7.如权利要求5所述的二茂铁基共价有机框架修饰电极的电化学检测肌钙蛋白的方法，其特征在于：该方法的检测下限为100fg/mL。 8.如权利要求5所述的二茂铁基共价有机框架修饰电极的电化学检测肌钙蛋白的方法，其特征在于：步骤一中将所得二茂铁基共价有机框架修饰电极用超纯水淋洗，加某一浓度肌钙蛋白富集30～90分钟后，得到修饰电极4，将此修饰电极4作为工作电极，银氯化银作为参比电极和铂丝对电极构成三电极体系，在混合磷酸盐缓冲液中进行微分脉冲伏安检测，测得差分脉冲曲线。 9.如权利要求5所述的二茂铁基共价有机框架修饰电极的电化学检测肌钙蛋白的方法，其特征在于：混合磷酸盐缓冲液为1～20mmol/L、pH为5.0～9.0的磷酸盐缓冲溶液。
所属类别：	发明专利