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原文传递禽类H9亚型禽流感抗体胶体金检测试纸和测试卡

专利名称：	禽类H9亚型禽流感抗体胶体金检测试纸和测试卡
摘要：	本发明提供一种禽类H9亚型禽流感抗体胶体金检测试纸和测试卡，可以检测多种禽类的免疫水平，适用范围广、特异性强、灵敏度高、操作简单、耗时短。所述试纸包含顺序连接的样品垫、金标垫和硝酸纤维素膜，其中，所述金标垫上包被有单克隆抗体鼠抗IgY Fc CH3‑CH4的胶体金标记物；所述硝酸纤维素膜上设有靠近金标垫一端的检测线和远离金标垫一端的质控线，所述检测线上包被有AIV‑HA19重组蛋白，所述质控线上包被有二抗，编码所述AIV‑HA19重组蛋白的DNA序列如SEQ ID NO.1所示。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	湖北;42
申请人：	华中农业大学
发明人：	李自力;邵雨;胡思顺;毕丁仁;王喜亮;肖运才;金卉
专利状态：	有效
申请日期：	2019-03-08T00:00:00+0800
发布日期：	2019-07-26T00:00:00+0800
申请号：	CN201910175094.9
公开号：	CN110058016A
代理机构：	北京三高永信知识产权代理有限责任公司
代理人：	徐立
分类号：	G01N33/569(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	430070 湖北省武汉市洪山区狮子山街1号
主权项：	1.一种禽类H9亚型禽流感抗体胶体金检测试纸，其特征在于，包含顺序连接的样品垫、金标垫和硝酸纤维素膜，其中，所述金标垫上包被有单克隆抗体鼠抗IgY Fc CH3-CH4的胶体金标记物；所述硝酸纤维素膜上设有靠近金标垫一端的检测线和远离金标垫一端的质控线，所述检测线上包被有AIV-HA19重组蛋白，所述质控线上包被有二抗，所述单克隆抗体鼠抗IgY Fc CH3-CH4由杂交瘤细胞株LZLPHZ分泌得到，编码所述AIV-HA19重组蛋白的DNA序列如SEQ ID NO.1所示。 2.如权利要求1所述的试纸，其特征在于，所述二抗为羊抗鼠IgG抗体。 3.如权利要求1所述的试纸，其特征在于，所述AIV-HA19重组蛋白的制备方法为： (1)扩增H9亚型禽流感病毒HA1基因，并在HA1基因5’端加上BamHI酶切位点，3’端加上XhoI酶切位点； (2)与pGEX-KG载体进行连接反应，得到所述重组质粒pGEX-KG-HA19，转化、表达后获得AIV-HA19重组蛋白。 4.如权利要求3所述的试纸，其特征在于，所述AIV-HA19重组蛋白的制备方法中，所述步骤(1)的具体方法为：通过上游引物P1和下游引物P2扩增HA1基因，其中上游引物P1：CCGGGATCCGATAAAATCTGCATCGGCTAC 下游引物P2：CGGCTCGAGTCTACTTGATCTAGCAGGCAC；扩增得到960bp的HA1基因片段。 5.如权利要求1所述的试纸，其特征在于，所述单克隆抗体鼠抗IgY FcCH3-CH4的胶体金标记物的制备方法如下： (1)生成胶体金； (2)于磁力搅拌下，用0.1M碳酸钾溶液调胶体金的pH值至8.0，按8.0μg抗体/mL胶体金加入上述单克隆抗体鼠抗IgY Fc CH3-CH4，继续搅拌混匀，加入10％牛血清白蛋白至终浓度为1％，静置30min后12000rpm、4℃离心30min，弃上清，沉淀用0.02M pH9.0的硼酸盐缓冲液洗涤两次，用十分之一初始胶体金体积的0.02M pH9.0的硼酸盐缓冲液，将沉淀重悬，得到单克隆抗体鼠抗IgY Fc CH3-CH4的胶体金标记物。 6.如权利要求5所述的试纸，其特征在于，所述胶体金通过水热法反应生成。 7.如权利要求6所述的试纸，其特征在于，所述胶体金由氯金酸和柠檬酸三钠通过水热法反应生成。 8.如权利要求5所述的试纸，其特征在于，所述硼酸盐缓冲液的配方为：硼酸0.1237g，PEG-20000 1g，用三蒸水定容至1000mL，调pH至9.0。 9.包含权利要求1-6中任一项所述试纸的测试卡。 10.如权利要求9所述的测试卡，其特征在于，所述测试卡由所述试纸装入测试卡壳中得到。
所属类别：	发明专利