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原文传递优化DNA序列、重组质粒、菌株、重组蛋白、鸡毒支原体抗体胶体金检测试纸和检测卡

专利名称：	优化DNA序列、重组质粒、菌株、重组蛋白、鸡毒支原体抗体胶体金检测试纸和检测卡
摘要：	本发明提供一种基于鸡毒支原体VlhA1.2蛋白的优化DNA序列、重组质粒、菌株、重组蛋白、包含所述重组蛋白的鸡毒支原体抗体胶体金检测试纸和检测卡，所述试纸可以用于快速检测禽类对于鸡毒支原体感染后诊断以及免疫后的抗体水平检测。所述优化DNA序列如SEQ ID NO.1所示。将所述优化DNA序列与pGEX‑KG载体连接，得到所述重组质粒pGEX‑KG‑VlhA1.2，转化、表达得到MG‑VlhA1.2重组蛋白。所述试纸包含顺序连接的金标垫和硝酸纤维素膜，其中，所述金标垫上包被有单克隆抗体鼠抗IgY Fc CH3‑CH4的胶体金标记物；所述硝酸纤维素膜上靠近金标垫的一端是包被有MG‑VlhA1.2重组蛋白的检测线。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	湖北;42
申请人：	华中农业大学
发明人：	李自力;邵雨;胡思顺;毕丁仁;周祖涛;刘梅;石德时;许青荣
专利状态：	有效
申请日期：	2019-03-08T00:00:00+0800
发布日期：	2019-07-26T00:00:00+0800
申请号：	CN201910175389.6
公开号：	CN110058017A
代理机构：	北京三高永信知识产权代理有限责任公司
代理人：	徐立
分类号：	G01N33/569(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	430070 湖北省武汉市洪山区狮子山街1号
主权项：	1.一种基于鸡毒支原体VlhA1.2蛋白的优化DNA序列，其特征在于，所述优化DNA序列如SEQ ID NO.1所示。 2.一种重组质粒，其特征在于，将如SEQ ID NO.1所示的所述优化DNA序列与pGEX-KG载体连接，得到所述重组质粒pGEX-KG-VlhA1.2。 3.如权利要求2所述的重组质粒，其特征在于，通过以下方法得到：将如SEQ ID NO.1所示的所述优化DNA序列的基因5’端加上EcoR I酶切位点，3’端加上XhoI酶切位点，与pGEX-KG载体进行连接反应，得到所述重组质粒pGEX-KG-VlhA1.2。 4.包含权利要求2或3所述重组质粒的菌株，其特征在于，所述重组质粒的菌株已于2018年11月13日保藏在中国典型培养物保藏中心，其保藏编号为CCTCC-M2018792。 5.由权利要求4所述菌株诱导表达得到的MG-VlhA1.2重组蛋白。 6.包含权利要求5所述MG-VlhA1.2重组蛋白的鸡毒支原体抗体胶体金检测试纸，其特征在于，包含顺序连接的样品垫、金标垫和硝酸纤维素膜，其中，所述金标垫上包被有单克隆抗体鼠抗IgY Fc CH3-CH4的胶体金标记物；所述硝酸纤维素膜上设有靠近金标垫一端的检测线和远离金标垫一端的质控线，所述检测线上包被有MG-VlhA1.2重组蛋白，所述质控线上包被有二抗，所述单克隆抗体鼠抗IgY Fc CH3-CH4由杂交瘤细胞株LZLPHZ分泌得到。 7.如权利要求6所述的试纸，其特征在于，所述二抗为羊抗鼠IgG抗体。 8.如权利要求6所述的试纸，其特征在于，所述单克隆抗体鼠抗IgY Fc CH3-CH4的胶体金标记物的制备方法如下： (1)生成胶体金； (2)于磁力搅拌下，用0.1M碳酸钾溶液调胶体金的pH值至8.0，按8.0μg抗体/mL胶体金加入上述单克隆抗体鼠抗IgY Fc CH3-CH4，继续搅拌混匀，加入10％牛血清白蛋白至终浓度为1％，静置30min后12000rpm、4℃离心30min，弃上清，沉淀用0.02M pH9.0的硼酸盐缓冲液洗涤两次，用十分之一初始胶体金体积的0.02M pH9.0的硼酸盐缓冲液，将沉淀重悬，得到单克隆抗体鼠抗IgY Fc CH3-CH4的胶体金标记物。 9.如权利要求8所述的试纸，其特征在于，步骤(1)中氯金酸和柠檬酸三钠通过水热法反应生成所述胶体金。 10.包含权利要求6-9中任意一项所述试纸的检测卡。
所属类别：	发明专利