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原文传递一种黄酮对照品的制备方法

专利名称：	一种黄酮对照品的制备方法
摘要：	本发明公开的一种黄酮对照品的制备方法，包括原料预处理、分项提取、分项分析、分类对比等多个步骤，通过多种提取方法制得同一原料的多种黄酮提取液，并分别采用硅胶柱色谱法和聚酰胺柱色谱法，进行分析得到多种对照品，同时，基于存在形态特征和黄酮苷元的极性特征，快速得到原料中黄酮苷类和黄酮苷元的含量和比例关系以及原料中黄酮类化合物的极性特征，从而为原料的黄酮对照品的制备提供指导，有助于提高中药黄酮对照品的精确度，提高中药黄酮对照品的有效性。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	江苏;32
申请人：	江苏永健医药科技有限公司
发明人：	顾正兵;陶月红;刘艳芳;徐丽丽;常义生
专利状态：	有效
申请日期：	2019-05-29T00:00:00+0800
发布日期：	2019-07-26T00:00:00+0800
申请号：	CN201910457908.8
公开号：	CN110057646A
代理机构：	北京中政联科专利代理事务所(普通合伙)
代理人：	何浩
分类号：	G01N1/28(2006.01);G;G01;G01N;G01N1
申请人地址：	225300 江苏省泰州市泰州中国医药城口泰路东侧、新阳路北侧G23(A3)六层轴1-轴6
主权项：	1.一种黄酮对照品的制备方法，其特征在于，包括以下具体步骤： (1)原料预处理： (1-1)取原料进行水洗，去除表面杂质，重复多次，制止完全洗净； (1-2)水洗完成，控干原料残留水分，并风干至干燥； (1-3)对原料进行切片，并送入高精度粉碎机中，进行粉碎，过200目筛，得到原料粉碎物； (2)原料分配，分项提取： (2-1)将步骤(1-3)所得的原料粉碎物按绝对质量平均分为4份，分别为原料A、原料B、原料C和原料D； (2-2)分别对步骤(2-1)的4份原料进行分项提取； (2-2-1)采用溶剂萃取法，对原料A进行提取，得到a号黄酮提取液； (2-2-2)采用碳粉吸附法，对原料B进行提取，得到b号黄酮提取液； (2-2-3)采用聚酰胺吸附法，对原料C进行提取，得到c号黄酮提取液； (2-2-4)采用沸腾提取法，对原料D进行提取，得到d号黄酮提取液； (3)提取液分配，分项分析： (3-1)分别将步骤(2-2-1)得到的a号黄酮提取液、步骤(2-2-2)得到的b号黄酮提取液、步骤(2-2-3)得到的c号黄酮提取液和步骤(2-2-4)得到的d号黄酮提取液，按质量平均分为2份，得到a-1号黄酮提取液和a-2号黄酮提取液、b-1号黄酮提取液和b-2号黄酮提取液、c-1号黄酮提取液和c-2号黄酮提取液以及d-1号黄酮提取液、d-2号黄酮提取液； (3-2)对步骤(3-1)中的提取液进行柱色分析： (3-2-1)按硅胶柱色谱法对a-1号黄酮提取液、b-1号黄酮提取液、c-1号黄酮提取液以及d-1号黄酮提取液进行黄酮类化合物分离，得到a-1号黄酮对照品、b-1号黄酮对照品、c-1号黄酮对照品和d-1号黄酮对照品； (3-2-2)按聚酰胺柱色谱法对a-2号黄酮提取液、b-2号黄酮提取液、c-2号黄酮提取液以及d-2号黄酮提取液进行黄酮类化合物分离，得到a-2号黄酮对照品、b-2号黄酮对照品、c-2号黄酮对照品和d-2号黄酮对照品。 2.如权利要求1所述的一种黄酮对照品的制备方法，其特征在于，步骤(2-2-1)所采用的溶剂萃取法，包括以下具体步骤： (A1)将原料A投入溶剂中，水浴控温在30～40℃，快速超声搅拌半小时，静置10分钟，取上层液，得到一次提取液，其中，本步骤中溶剂的绝对质量为原料A绝对质量的比例为5～10：1； (A2)望取上层液后的剩余液体中，重新加入溶剂，并快速超声搅拌20分钟，随后送入离心过滤机中，过滤杂质，即得二次提取液； (A3)将一次提取液和二次提取液混合再精滤，即得a号黄酮提取液；其中，步骤(A1)和(A2)中所述的溶剂为乙醚或乙酸乙酯中的一种。 3.如权利要求2所述的一种黄酮对照品的制备方法，其特征在于，步骤(2-2-2)所采用的碳粉吸附法，包括以下具体步骤： (B1)将原料B投入50％的甲醇溶液中，混合搅拌1小时后，过滤得到甲醇粗提液； (B2)向步骤(B2)的甲醇粗提液加入活性炭，对甲醇进行吸附； (B3)待甲醇吸附完成，去除粗提液中的活性炭，并对除去甲醇的粗提液进行过滤，随后，低压脱水，即得b号黄酮提取液。 4.如权利要求3所述的一种黄酮对照品的制备方法，其特征在于，步骤(2-2-3)所采用的聚酰胺吸附法，包括以下具体步骤： (C1)将原料C与溶剂混合，并水浴加热回流至少3次，每次回流时间1小时，水浴温度控制在71～85℃，其中，原料C的绝对质量与每次回流所用的溶剂的绝对质量的比例为1:80～120； (C2)待多次回流完成，合并所得的回流液，减压蒸馏除去溶剂，随后过滤残渣； (C3)待残渣过滤完成，向蒸馏后的回流液中加入20％体积的水，并用石油醚萃取3次，萃取温度控制在60～90℃，每次的石油醚用量为加水后回流液总体积的30％～50％； (C4)待萃取完成，减压再蒸馏，并过聚酰胺柱，同时，用洗脱剂进行洗脱，直至无黄酮类物质为止，此时，将洗脱液减压浓缩，即得c号黄酮提取液；其中，步骤(C1)和(C2)中所述的溶剂为50％的乙醇溶液。 5.如权利要求4所述的一种黄酮对照品的制备方法，其特征在于，步骤(2-2-4)所采用的沸腾提取法，包括以下具体步骤： (D1)将溶液加入至密封容器中，进行加热，直至达到提取温度； (D2)将原料D加热至溶液中，并快速搅拌30分钟，期间维持溶液在提取温度不变； (D3-1)溶液为40％乙醇溶液，持续搅拌，并降低和维持密封容器内在0.03MPa的绝对压力下，使溶液在低压状态下内部沸腾，进行提取，得到粗提液； (D3-2)溶液为纯水，持续搅拌，并降低和维持密封容器内在0.2MPa的绝对压力下，使溶液在低压状态下内部沸腾，进行提取，得到粗提液；其中，当溶液为40％乙醇溶液时，溶液的提取温度为50℃，当溶液为纯水时，溶液的提取温度为60℃； (D4)得到的粗提液进行减压浓缩，即得d号黄酮提取液。 6.如权利要求1或5所述的一种黄酮对照品的制备方法，其特征在于，对步骤(3-2-1)中得到的a-1号黄酮对照品、b-1号黄酮对照品、c-1号黄酮对照品和d-1号黄酮对照品进行硅胶柱色谱分析，得到基于硅胶柱色谱法分析得出的a号黄酮对照品、b号黄酮对照品、c号黄酮对照品和d号黄酮对照品。 7.如权利要求6所述的一种黄酮对照品的制备方法，其特征在于，对步骤(3-2-2)中得到的a-1号黄酮对照品、b-1号黄酮对照品、c-1号黄酮对照品和d-1号黄酮对照品进行聚酰胺柱色谱分析，得到基于聚酰胺柱色谱法分析出的a号黄酮对照品、b号黄酮对照品、c号黄酮对照品和d号黄酮对照品。 8.如权利要求7所述的一种黄酮对照品的制备方法，其特征在于，将基于硅胶柱色谱法分析得出的a号黄酮对照品、b号黄酮对照品、c号黄酮对照品、d号黄酮对照品以及基于聚酰胺柱色谱法分析出的a号黄酮对照品、b号黄酮对照品、c号黄酮对照品、d号黄酮对照品的8个对照品进行分类对比。 9.如权利要求8所述的一种黄酮对照品的制备方法，其特征在于，8个对照品的分类标准基于两个特征：1、黄酮类化合物的存在形态特征：黄酮苷类和黄酮苷元；2、黄酮苷元的极性特征：极性大和小。 10.如权利要求9所述的一种黄酮对照品的制备方法，其特征在于，基于8个对照品的分类对比，可快速得到原料中黄酮苷类和黄酮苷元的含量和比例关系以及原料中黄酮类化合物的极性特征，进而得出对所述原料进行黄酮提取的适宜方法，即步骤(2-2)下的4种提取法之一。
所属类别：	发明专利