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原文传递基于石墨烯和点击化学的铜离子检测方法、其试剂盒及应用

专利名称：	基于石墨烯和点击化学的铜离子检测方法、其试剂盒及应用
摘要：	本专利提供了一种基于石墨烯和点击化学的铜离子检测方法。通过一步化学反应，石墨烯表面即可修饰上炔烃基团，由于石墨烯具有非常强的荧光猝灭效应。因此其可以和含有叠氮基团的荧光分子在铜离子存在的情况下发生点击化学反应并猝灭铜离子的荧光，实现铜离子的高灵敏检测。由于石墨烯具有很大的比表面积，因此在修饰了炔烃的同一个石墨烯上面会有很多叠氮基团的反应位点，因此该反应的速度要快于小分子之间直接反应。该反应可以用于临床上铜离子代谢疾病的初步评估，也可以用于科研工作中细胞内铜离子的成像。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	北京;11
申请人：	国家纳米科学中心
发明人：	蒋兴宇;郑问枢;张江江
专利状态：	有效
申请日期：	2017-10-13T00:00:00+0800
发布日期：	2019-04-23T00:00:00+0800
申请号：	CN201710952020.2
公开号：	CN109668863A
代理机构：	北京市英智伟诚知识产权代理事务所(普通合伙)
代理人：	刘丹妮
分类号：	G01N21/64(2006.01);G;G01;G01N;G01N21
申请人地址：	100190 北京市海淀区中关村北一条11号
主权项：	1.一种基于石墨烯和点击化学的铜离子检测方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤： (1)将炔烃修饰的石墨烯与含有叠氮基团的罗丹明在PBS缓冲液中混合，所述炔烃修饰的石墨烯浓度优选为10～100mg/mL，更优选为30～80mg/mL，最优选为50mg/mL； (2)将待测样品与抗坏血酸加入到步骤(1)制备的混合液中； (3)对步骤(2)得到的混合液进行荧光光谱的测量。 2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述炔烃修饰的石墨烯通过以下方法制备： (a)将氨基修饰的石墨烯溶解在甲醇溶液中，所述甲醇溶液体积分数优选为1～20％，更优选为5～15％，最优选为10％； (b)将步骤(a)所得的石墨烯溶液加入到HEPES缓冲液中，并加入炔烃-NHS，搅拌，制得炔烃修饰的石墨烯。 3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：步骤(a)中，所述溶解过程为将混合溶液超声1～8小时，优选为1～5小时，最优选为3小时；和/或步骤(b)中，所述HEPES缓冲液pH为7.4，浓度为0.01～1M，优选为0.05～0.2M，最优选为0.1M。 4.根据权利要求2或3所述的方法，其特征在于，步骤(b)中，所述炔烃-NHS选自乙炔-PEGn-NHS和/或乙炔-Cn-NHS；优选地，所述乙炔-PEGn-NHS和/或乙炔-Cn-NHS中，n＝2～10；最优选地，所述炔烃-NHS为乙炔-PEG4-NHS。 5.根据权利要求2至4中任一项所述的方法，其特征在于，所述方法还包括步骤(c)：将步骤(b)所得炔烃修饰的石墨烯离心提纯，并重新分散于PBS缓冲液中。 6.一种基于石墨烯和点击化学的铜离子检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：炔烃修饰的石墨烯，所述炔烃修饰的石墨烯浓度优选为10～100mg/mL，更优选为30～80mg/mL，最优选为50mg/mL；含有叠氮基团的罗丹明； PBS缓冲液；和抗坏血酸。 7.根据权利要求6所述的检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中，以以下试剂替代所述炔烃修饰的石墨烯：氨基修饰的石墨烯；甲醇溶液；和 HEPES缓冲液；炔烃-PEG4-NHS。 8.根据权利要求7所述的检测试剂盒，其特征在于：所述甲醇溶液体积分数为1～20％，优选为5～15％，最优选为10％；和/或所述HEPES缓冲液pH为7.4，浓度为0.01～1M、优选为0.05～0.5M、最优选为0.1M。 9.根据权利要求6至8中任一项所述试剂盒在制备用于评估、检测和/或诊断铜离子代谢疾病的产品中的应用；优选地，所述铜离子代谢疾病为肝豆核状变性。 10.根据权利要求6至8中任一项所述试剂盒在制备用于细胞内铜离子的成像的检测产品中的应用。
所属类别：	发明专利