专利名称: |
聚乙二醇化蛋白类药物的平均修饰度测定方法 |
摘要: |
本发明公开了一种聚乙二醇化蛋白类药物的平均修饰度测定方法,包括如下步骤:(1)使用与未修饰蛋白类药物标准品、聚乙二醇标准品的浓度呈线性关系的多种类型的检测器,分别建立未修饰蛋白类药物标准品、聚乙二醇标准品的浓度与其各自浓度对应的每种类型检测器响应值的标准曲线;(2)检测聚乙二醇化蛋白类药物的响应值;(3)根据标准曲线计算聚乙二醇化蛋白类药物中聚乙二醇、蛋白的含量;(4)计算聚乙二醇化蛋白类药物的平均修饰度。该方法可直接检测PEG修饰蛋白中的蛋白和PEG的量来确定PEG的修饰度,克服现有技术受外界干扰大的缺陷,具有准确性高、重现性好、通用性强、可标准化的特点。 |
专利类型: |
发明专利 |
国家地区组织代码: |
重庆;50 |
申请人: |
重庆派金生物科技有限公司 |
发明人: |
何云凤;丁琼;刘日勇;胡春兰;范开 |
专利状态: |
有效 |
申请日期: |
2019-03-01T00:00:00+0800 |
发布日期: |
2019-04-26T00:00:00+0800 |
申请号: |
CN201910154241.4 |
公开号: |
CN109682901A |
代理机构: |
重庆中之信知识产权代理事务所(普通合伙) |
代理人: |
袁庆民 |
分类号: |
G01N30/02(2006.01);G;G01;G01N;G01N30 |
申请人地址: |
400700 重庆市北碚区丰和路106号 |
主权项: |
1.聚乙二醇化蛋白类药物的平均修饰度测定方法,其特征在于:包括如下步骤: (1)使用与未修饰蛋白类药物标准品、聚乙二醇标准品的浓度呈线性关系的多种类型的检测器,分别建立未修饰蛋白类药物标准品、聚乙二醇标准品的浓度与其各自浓度对应的每种类型检测器响应值的标准曲线;多种检测器可以组成检测单元,检测单元包括至少两种类型检测器; 其中,一种类型检测器能同时检测聚乙二醇和未修饰蛋白且聚乙二醇与未修饰蛋白的响应值互不干扰,另一种类型检测器只能检测聚乙二醇或未修饰蛋白的响应值; (2)使用步骤(1)中的检测单元中的多种类型检测器检测聚乙二醇化蛋白类药物的响应值; (3)根据步骤(2)中检测器的类型以及步骤(1)中对应类型的检测器的标准曲线分别计算聚乙二醇化蛋白类药物中聚乙二醇、蛋白的含量; (4)根据公式计算聚乙二醇化蛋白类药物的平均修饰度。 2.根据权利要求1所述的聚乙二醇化蛋白类药物的平均修饰度测定方法,其特征在于:步骤(1)中检测单元包括:紫外检测器、示差折光指数检测器、蒸发光散射检测器、电雾式检测器、荧光检测器中任意两种或两种以上的组合与HPLC串联。 3.根据权利要求2所述的聚乙二醇化蛋白类药物的平均修饰度测定方法,其特征在于:HPLC上串联的检测器包括UV-RI、UV-ELSD、UV-CAD中的一种。 4.根据权利要求2或3所述的聚乙二醇化蛋白类药物的平均修饰度测定方法,其特征在于:HPLC的色谱柱类型包括分子筛排阻层析、离子交换层析、反相层析、亲和层析、疏水层析。 5.根据权利要求4所述的聚乙二醇化蛋白类药物的平均修饰度测定方法,其特征在于:紫外检测器的检测波长为200~380nm。 6.根据权利要求1所述的聚乙二醇化蛋白类药物的平均修饰度测定方法,其特征在于:所述聚乙二醇包括单端活化、双端活化或多端活化的活化基团。 7.根据权利要求6所述的聚乙二醇化蛋白类药物的平均修饰度测定方法,其特征在于:所述活化基团包括醛基、羧基、脂基、酰胺基、巯基、环氧基、马来酰亚胺基、琥珀酰亚胺碳酸酯、琥珀酰亚胺乙酸酯、琥珀酰亚胺丙酸酯、羰基醛、酰肼、氨基。 8.根据权利要求1、6或7所述的聚乙二醇化蛋白类药物的平均修饰度测定方法,其特征在于:所述聚乙二醇分子量为1000~40000道尔顿。 9.根据权利要求8所述的聚乙二醇化蛋白类药物的平均修饰度测定方法,其特征在于:所述蛋白类药物包括多肽、酶、细胞因子、激素、抗体类药物。 10.根据权利要求9所述的聚乙二醇化蛋白类药物的平均修饰度测定方法,其特征在于:所述蛋白类药物具体包括多肽、胰岛素、白细胞介素、干扰素、天门冬酰胺酶、腺甙脱氢酶、精氨酸酶、精氨酸脱亚胺酶、尿酸氧化酶、苯丙氨酸裂解酶、犬尿氨酸酶、甲硫氨酸裂解酶、水蛭素、白蛋白、生长激素、粒细胞集落刺激因子、促红细胞生成素、抗血友病因子。 |
所属类别: |
发明专利 |