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原文传递一种用于从血清中检测叶酸含量的解离剂及检测方法

专利名称：	一种用于从血清中检测叶酸含量的解离剂及检测方法
摘要：	本发明涉及一种用于从血清中检测叶酸含量的解离剂及检测方法，包括蛋白变性剂、蛋白水解酶、表面活性剂和基础液，其中各组分的用量为：每100ml解离剂中含有蛋白变性剂3～8g，蛋白水解酶1000～3000U，表面活性剂0.2～0.8ml，余量为基础液。与现有技术相比，本发明具有方法简单，灵敏度高、检测结果准确等优点。
专利类型：	发明专利
申请人：	上海复星长征医学科学有限公司
发明人：	陶然
专利状态：	有效
申请日期：	1900-01-20T00:00:00+0805
发布日期：	1900-01-20T17:00:00+0805
申请号：	CN201911416335.0
公开号：	CN111024962A
代理机构：	上海科盛知识产权代理有限公司
代理人：	蒋亮珠
分类号：	G01N33/82;G01N21/76;G;G01;G01N;G01N33;G01N21;G01N33/82;G01N21/76
申请人地址：	200444 上海市宝山区城银路830号
主权项：	1.一种用于从血清中检测叶酸含量的解离剂，其特征在于，包括蛋白变性剂、蛋白水解酶、表面活性剂和基础液，其中各组分的用量为：每100ml解离剂中含有蛋白变性剂3～8g，蛋白水解酶1000～3000U，表面活性剂0.2～0.8ml，余量为基础液。 2.根据权利要求1所述的一种用于从血清中检测叶酸含量的解离剂，其特征在于，所述的蛋白变性剂为尿素。 3.根据权利要求1所述的一种用于从血清中检测叶酸含量的解离剂，其特征在于，所述的蛋白水解酶为蛋白酶K。 4.根据权利要求1所述的一种用于从血清中检测叶酸含量的解离剂，其特征在于，所述的表面活性剂为Tween-80。 5.根据权利要求1所述的一种用于从血清中检测叶酸含量的解离剂，其特征在于，所述的基础液为磷酸盐缓冲液。 6.一种采用如权利要求1～5中任一所述解离剂从血清中检测叶酸含量的方法，其特征在于，使用化学发光试剂盒进行检测，包括以下步骤： (1)将待检测血清与解离剂按体积比1:1混合，在37℃条件下反应15min； (2)在处理好的血清与解离剂的混合液中添加生物素标记的叶酸结合蛋白，在37℃条件下反应10min； (3)向反应好的体系中添加碱性磷酸酶标记的叶酸，在37℃条件下反应10min； (4)向反应好的体系中添加链霉亲和素标记的磁珠，在37℃条件下反应5min； (5)进行清洗并加入化学发光液，机器测量发光信号，报值血清中叶酸浓度。 7.根据如权利要求6所述解离剂从血清中检测叶酸含量的方法，其特征在于，步骤(2)所述生物素标记的叶酸结合蛋白通过以下方法获得：0.1mg的叶酸结合蛋白中加入5ul10mM生物素标记物在室温条件下反应30分钟后，使用离心脱盐柱脱盐处理，脱盐过程中首先用PBS预处理脱盐柱，收集离心管中的混合液，加入等体积的甘油，混匀，-20℃保存；步骤2中生物素标记的叶酸结合蛋白的加入量与血清与解离剂的混合液的体积比为25：50000，稀释比例为1:500，具体依据生物素每批次标记的叶酸结合蛋白的活性而定。 8.根据如权利要求6所述解离剂从血清中检测叶酸含量的方法，其特征在于，步骤(3)所述的碱性磷酸酶标记的叶酸具体标记方法为：取0.2mg碱性磷酸酶(ALP)，用纯化水配制成10mg/mL的浓度，加入与ALP溶液等体积的高碘酸钠溶液，高碘酸钠溶液的浓度为12.8mg/mL，4℃避光反应30分钟；加入与ALP溶液等体积的1％乙二醇溶液，4℃避光反应45分钟，加入0.1mg folic acid(FA)-BSA，混合，用离心脱盐柱脱盐处理，脱盐过程中首先用PBS预处理脱盐柱，收集离心管中的混合液，按每毫克抗体20μl的量加入浓度为5mg/mL硼氢化钠溶液，4℃避光反应2小时，缓慢加入等体积的饱和硫酸铵溶液，4℃反应2小时，离心，弃去上清，沉淀用PBS溶解，用离心脱盐柱脱盐处理，脱盐过程中首先用PBS预处理脱盐柱，收集离心管中的液体，加入等体积的甘油，混匀，-20℃保存；步骤3中碱性磷酸酶标记的叶酸的加入量为与血清与解离剂的混合液的体积比为25：50000，稀释比例为1:500，具体依据每批次碱性磷酸酶标记的叶酸活性而定。 9.根据如权利要求6所述解离剂从血清中检测叶酸含量的方法，其特征在于，步骤(4)所述的链霉亲和素标记的磁珠为GE公司市售Sera-Mag SpeedBeads磁珠，所述的链霉亲和素标记的磁珠的加入量为与血清与解离剂的混合液的体积比为25：100，磁珠的浓度为0.2mg/ml。 10.根据如权利要求6所述解离剂从血清中检测叶酸含量的方法，其特征在于，步骤(5)所述的化学发光液为武汉瀚海新酶生物科技有限公司市售底物化学发光液，所述的化学发光液的加入量为与血清与解离剂的混合液的体积比为100：100。
所属类别：	发明专利