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原文传递一种人血清中左乙拉西坦含量的检测方法

专利名称：	一种人血清中左乙拉西坦含量的检测方法
摘要：	本发明提供了一种人血清中左乙拉西坦含量的检测方法，即采用高效液相色谱法对血清中左乙拉西坦的含量进行定性和/或定量检测，包括以下步骤：S1、血清样品预处理，取血清样本与二氯甲烷混合，涡旋震荡，在常温下于高速离心，取下清液，于常温下使用氮气吹干，再加入复溶液，涡旋混匀，在常温下于高速离心，得到上清液，即为待测样品；S2、标准品溶液的标定，将含左乙拉西坦的系列保准品溶液进行S1相同的前处理得到待测标准品溶液并检测；S3、待测样品检测。本发明通过液液萃取的方法进行除杂，通过氮气浓缩，再采用高效液相色谱法进一步分离，对血清中的左乙拉西坦含量进行定量和/或定性分析，检测过程简单，提取步骤少，提取用时少。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	陕西;61
申请人：	西安和合医学检验所有限公司
发明人：	杨薇;高长文;徐鹏飞;南艳平;师斌;贾永娟;赵金宝;沈建军
专利状态：	有效
申请日期：	2019-08-14T00:00:00+0800
发布日期：	2019-10-01T00:00:00+0800
申请号：	CN201910749589.8
公开号：	CN110297054A
代理机构：	西安铭泽知识产权代理事务所(普通合伙)
代理人：	徐云侠
分类号：	G01N30/02(2006.01);G;G01;G01N;G01N30
申请人地址：	710003 陕西省西安市国家民用航天产业基地工业二路299号11幢10201,10202室
主权项：	1.一种人血清中左乙拉西坦含量的检测方法，其特征在于，采用高效液相色谱法对血清中左乙拉西坦的含量进行定性和/或定量检测，包括以下步骤： S1、血清样品预处理取100μL血清样本与1000μL二氯甲烷混合，涡旋震荡5min，在常温下于14000r高速离心5min，取下清液950μL，于常温下使用氮气吹干，再加入100～300μL复溶液，涡旋混匀3min，在常温下于14000r高速离心5min，得到上清液，即为待测样品； S2、标准品溶液的标定将含左乙拉西坦浓度为12.5～800μg/mL的系列浓度的标准品溶液进行前处理得到待测标准品溶液，将待测标准品溶液使用高效液相色谱仪进行检测，得到不同浓度待测标准品溶液的信号强度，以待测标准品溶液的浓度为横坐标x，相应浓度的信号强度作为纵坐标y，将以上检测所得到的的至少三组数据进行线性回归，拟合得到标准曲线方程y＝ax+b，并且得出权重系数a和b； S3、待测样品检测将S1得到的待测样品通过高效液相色谱仪中的色谱柱进行初步分离，再使用紫外检测器检测，得到待测样品在固定保留时间下的信号，根据信号的有无进行血清中左乙拉西坦的定性检测；将S1得到的待测样品使用高效液相色谱仪进行检测，得到待测样品的信号强度，将得到的信号强度代入S2得到的标准曲线方程y＝ax+b中，通过计算得到待测样品中左乙拉西坦的浓度。 2.根据权利要求1所述的一种人血清中左乙拉西坦含量的检测方法，其特征在于，所述S2中系列浓度的标准品溶液的制备过程为：将左乙拉西坦标准品与甲醇混合得到左乙拉西坦标含量为1mg/mL的储存液，并将储存液进行一系列稀释，得到左乙拉西坦浓度分别为800，500，250，125，50，25，12.5μg/mL的标准品溶液。 3.根据权利要求2所述的一种人血清中左乙拉西坦含量的检测方法，其特征在于，所述稀释液由甲醇和水按照3:7的体积比混合得到。 4.根据权利要求3所述的一种人血清中左乙拉西坦含量的检测方法，其特征在于，所述标准品溶液进行前处理过程为：将10μL标准品溶液与90μL空白血清加入1000μL二氯甲烷混合，涡旋震荡5min，在常温下于14000r高速离心5min，取下清液950μL，于常温下使用氮气吹干，加入100～300μL复溶液，涡旋混匀3min，在常温下于14000r高速离心5min，得到上清液，即为待测标准品溶液。 5.根据权利要求1或4所述的一种人血清中左乙拉西坦含量的检测方法，其特征在于，所述S1中复溶液的加入量为200μL，所述复溶液由乙腈和水按照1:9的体积比混合得到。 6.根据权利要求1或4所述的一种人血清中左乙拉西坦含量的检测方法，其特征在于，所述S1中涡旋的转速为1500r/min。 7.根据权利要求1所述的一种人血清中左乙拉西坦含量的检测方法，其特征在于，所述S2和S3中高效色谱仪检测的条件为：固定相：C18色谱柱；流动相：乙腈-无机盐溶液；梯度洗脱分离；柱温35℃；检测波长225nm。 8.根据权利要求6所述的一种人血清中左乙拉西坦含量的检测方法，其特征在于，所述色谱柱为Waters -C18，所述C18色谱柱的规格为100mm×2.1mm，填料粒径为3.5μm。 9.根据权利要求6所述的一种人血清中左乙拉西坦含量的检测方法，其特征在于，所述流动相的具体组成为：流动相A：含有5mmoL/L磷酸二氢钠，用体积分数为25％磷酸调节pH的水溶液；流动相B：乙腈。 10.根据权利要求6所述的一种人血清中左乙拉西坦含量的检测方法，其特征在于，所述梯度洗脱过程为：0～2min，11％B；2～3min，100％B；3～12min，11％B；流速为0.25mL/min；进样量为5μL；其中，梯度洗脱过程中的A、B采用体积百分比。
所属类别：	发明专利