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原文传递一种同时检测TMV、PVY和TVBMV的速测卡及其制备、使用方法

专利名称：	一种同时检测TMV、PVY和TVBMV的速测卡及其制备、使用方法
摘要：	本发明涉及一种免疫金标速测卡，应用双抗体夹心免疫层析的原理，同时检测植物样本中的烟草花叶病毒（TMV）、马铃薯Y病毒（PVY）和烟草脉带花叶病毒TVBMV。检测时，首先向加样孔中加入待检样本，如果样本中含有待检测物质，则样本中的抗原在侧向移动的过程中与位于金标垫上的胶体金标记的特异性单克隆抗体结合，然后在NC膜检测线上与相应的特异性多克隆抗体结合，则该检测线（T线）显色，多余的金标单克隆抗体则与控制线上的二抗结合，控制线（C线）显色；如果样本中不含有待检测物质，则检测线（T线）不显色，控制线（C线）显色。并应用其针对叶片样品中TMV、PVY、TVBMV的快速、现场和灵敏的检测。
专利类型：	发明专利
申请人：	贵州省烟草科学研究院
发明人：	贾蒙骜;郭玉双;余婧
专利状态：	有效
申请日期：	1900-01-20T00:00:00+0805
发布日期：	1900-01-20T00:00:00+0805
申请号：	CN201911418817.X
公开号：	CN111077318A
代理机构：	贵阳中新专利商标事务所
代理人：	张行超
分类号：	G01N33/577;G01N33/569;G01N33/558;G;G01;G01N;G01N33;G01N33/577;G01N33/569;G01N33/558
申请人地址：	550081 贵州省贵阳市观山湖区龙滩坝路29号
主权项：	1.一种同时检测烟草花叶病毒TMV、马铃薯Y病毒PVY和烟草脉带花叶病毒TVBMV的速测卡，包含：底板上依次粘贴的样品垫、金标垫、NC膜以及吸收垫，其特征在于：所述的金标垫固定有胶体金标记的TMV单克隆抗体、PVY单克隆抗体和TVBMV单克隆抗体，所述的NC膜有三条检测线，分别固定TMV、PVY或TVBMV特异性多克隆抗体。 2.根据权利要求1所述的一种同时检测烟草花叶病毒TMV、马铃薯Y病毒PVY和烟草脉带花叶病毒TVBMV的速测卡，其特征在于：TMV单克隆抗体、PVY单克隆抗体和TVBMV单克隆抗体分别由分泌TMV单克隆抗体的杂交瘤细胞株、分泌PVY单克隆抗体的杂交瘤细胞株和分泌TVBMV单克隆抗体的杂交瘤细胞株制备得到。 3.根据权利要求1所述的一种同时检测烟草花叶病毒TMV、马铃薯Y病毒PVY和烟草脉带花叶病毒TVBMV的速测卡，其特征在于：在金标垫上固定25ng-50ng三种单克隆抗体，优化的量为TMV单克隆抗体30ng，PVY单克隆抗体36ng，TVBMV单克隆抗体45ng； NC膜上固定0.4μg-1.2μg三种特异性多克隆抗体，优化的量为TMV多克隆抗体0.6μg，PVY多克隆抗体0.9μg，TVBMV多克隆抗体0.8μg。 4.根据权利要求2所述的一种同时检测烟草花叶病毒TMV、马铃薯Y病毒PVY和烟草脉带花叶病毒TVBMV的速测卡，其特征在于：分泌TMV单克隆抗体的杂交瘤细胞株，保藏编号为CCTCC NO: C2019177；分泌PVY单克隆抗体的杂交瘤细胞株，保藏编号为CCTCC NO:C2019178；分泌TVBMV单克隆抗体的杂交瘤细胞株，保藏编号为CCTCC NO:C2019180。 5.根据权利要求1所述的一种同时检测烟草花叶病毒TMV、马铃薯Y病毒PVY和烟草脉带花叶病毒TVBMV的速测卡，其特征在于：还包括封盖板，所述的封盖板设置加样孔和结果观察孔，加样孔对应样品垫的位置，结果观察孔对应金标垫和NC膜位置。 6.如权利要求1-5之一所述的一种同时检测烟草花叶病毒TMV、马铃薯Y病毒PVY和烟草脉带花叶病毒TVBMV的速测卡的制备方法，其特征在于：（1）将TMV、PVY和TVBMV的特异性单克隆抗体和二抗分别固定于NC膜上；（2）在碱性条件下将胶体金颗粒分别与TMV特异性单克隆抗体、抗PVY特异性单克隆抗体和抗TVBMV特异性单克隆抗体通过静电作用力相互结合；（3）速测卡的组装：底板上依次粘贴的样品垫、金标垫、NC膜以及吸收垫，加盖封盖板与底板合并形成速测卡。 7.根据权利要求1-5之一所述的一种同时检测烟草花叶病毒TMV、马铃薯Y病毒PVY和烟草脉带花叶病毒TVBMV的速测卡的使用方法，其特征在于：首先于加样孔中加入样品溶液并水平放置，8-10min后，于结果观察孔中观察颜色变化，作出判断；如果只有控制线C线，没有相应的检测线T线，则表明为待检物质为阴性；既有控制线C线，又有相应的检测线T线，则表明待检物质为阳性。 8.根据权利要求1-4之一所述的一种同时检测烟草花叶病毒TMV、马铃薯Y病毒PVY和烟草脉带花叶病毒TVBMV的速测卡，其特征在于：所述的TMV多克隆抗体、PVY多克隆抗体和VBMV多克隆抗体分别由TMV、PVY和TVBMV病毒粒子免疫实验兔后取血清纯化后获取。
所属类别：	发明专利