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原文传递基于血清的布鲁氏菌疫苗株感染与野毒株感染快速鉴别方法

专利名称：	基于血清的布鲁氏菌疫苗株感染与野毒株感染快速鉴别方法
摘要：	本发明提供了基于血清的布鲁氏菌疫苗株感染与野毒株感染快速鉴别方法。本发明根据布鲁氏菌疫苗株感染人血清和野毒株感染人血清的质谱数据，通过ClinProTools软件的监督神经网络算法（SNN）模型算法构建感染布鲁氏菌疫苗株、野毒株血清的标准检测模型，并获得了用于鉴别布鲁氏菌疫苗株、野毒株感染血清的特征蛋白组合，所构建模型的识别能力为100%，交叉验证值为95.13%。利用标准检测模型对待测血清的MALDI‑TOF MS质谱数据进行分类分析，可准确判断待检测血清是否为布鲁氏菌疫苗株感染或野毒株感染。本发明方法准确度高、重复性好，通量高，检测成本低廉，结果可靠，具有良好的应用前景。
专利类型：	发明专利
申请人：	中国疾病预防控制中心传染病预防控制所
发明人：	肖迪;姜海;张炳华;张慧芳;王磊;杨文涛;赵飞;李天一
专利状态：	有效
申请日期：	1900-01-20T09:00:00+0805
发布日期：	1900-01-20T14:00:00+0805
申请号：	CN202010156406.4
公开号：	CN111007140A
代理机构：	北京路浩知识产权代理有限公司
代理人：	陈征
分类号：	G01N27/62;G16B5/00;G16B50/00;G;G01;G16;G01N;G16B;G01N27;G16B5;G16B50;G01N27/62;G16B5/00;G16B50/00
申请人地址：	102206 北京市昌平区昌百路155号
主权项：	1.一种用于鉴别感染布鲁氏菌疫苗株血清和野毒株血清的特征蛋白组合，其特征在于，所述特征蛋白组合中每个特征蛋白的质荷比m/z分别为：2280.67、2306.97、2977.37、3426.41、4589.44、6852.24、7010.41、7922.91。 2.权利要求1所述的特征蛋白组合在构建鉴别布鲁氏菌（Brucella）疫苗株感染血清和野毒株感染血清的试剂盒或检测模型中的应用。 3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，利用ClinProTools软件的SNN模型算法进行构建。 4.一种用于鉴别感染布鲁氏菌（Brucella）疫苗株血清和野毒株血清的标准检测模型，其特征在于，通过以下方法构建得到：（1）将具有统计学意义数量的布鲁氏菌野毒株感染的人血清样本、布鲁氏菌疫苗株感染的人血清样本经富集蛋白处理后，采集血清样本的MALDI-TOF MS质谱数据形成两组数据；（2）利用ClinProTools软件，按软件使用要求编辑参数，将步骤（1）中获得的两组质谱数据调入，进行峰统计分析；（3）选择模型算法，构建得到标准检测模型，并确定8个特征蛋白，每个特征蛋白的质荷比m/z分别为：2280.67、2306.97、2977.37、3426.41、4589.44、6852.24、7010.41、7922.91。 5.根据权利要求4所述的标准检测模型，其特征在于，所述模型算法为监督神经网络算法SNN，算法参数选择：模型中的最大峰数目为25，循环上线选择应用原型数自动检测。 6.权利要求4或5所述的标准检测模型在构建布鲁氏菌疫苗株感染血清和野毒株感染血清检测系统中的应用。 7.一种鉴别感染布鲁氏菌病疫苗株血清和野毒株血清的检测系统，其特征在于，所述检测系统的工作程序包括以下步骤：（1）前处理待检测血清样本，以富集血清中的蛋白；（2）前处理后的血清样本点到质谱仪样本靶上，自然干燥后在样本上覆盖基质饱和溶液；（3）采用质谱仪采集数据，每个样本平行采集两张原始谱图数据；（4）采用ClinProTools软件调用权利要求4或5所述标准检测模型对步骤（3）获得的全部待测血清样本的原始数据进行检索分类，确定检测的血清样本是来源于布鲁氏菌野毒株感染者还是布鲁氏菌疫苗株感染者。 8.根据权利要求7所述的检测系统，其特征在于，步骤（3）中，采集的数据强度叠加至少为1.0×104。 9.根据权利要求7或8所述的检测系统，其特征在于，步骤（3）中所述质谱仪为MALDI-TOF 质谱仪，氮激光器波长377nm, 质量采集范围1000至20000Da，源1电压, 20 kV, 源2电压, 18.5 kV, 透镜电压, 8.45 kV；延时提取, 320 ns；激光频率20Hz，调整总采集频次使谱图总强度大于10000；采用大肠杆菌ATCC8739质控校正仪器，使质量偏差小于300ppm。
所属类别：	发明专利