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原文传递一种IV型胶原蛋白的检测试剂盒及其制备方法

专利名称：	一种IV型胶原蛋白的检测试剂盒及其制备方法
摘要：	本发明公开了一种IV型胶原蛋白的检测试剂盒及其制备方法，该技术方案以其特点在于，运用组合型偶联剂，将Ⅳ型胶原蛋白抗体交联于羧基胶乳微球上，形成Ⅳ型胶原蛋白抗体胶乳颗粒，实现抗体与胶乳微球的高效偶联。在37℃恒温，波长为600nm下，测定吸光度，计算出样品IV型胶原蛋白含量。与传统偶联方法相比，本试剂盒抗体利用率高，精密度高，能有效控制批间差，值得进一步推广使用。
专利类型：	发明专利
申请人：	王贤俊
发明人：	王贤俊;郑蓓蕾
专利状态：	有效
申请日期：	1900-01-20T00:00:00+0805
发布日期：	1900-01-20T15:00:00+0805
申请号：	CN201911384289.0
公开号：	CN111157740A
代理机构：	温州名创知识产权代理有限公司
代理人：	陈加利
分类号：	G01N33/68;G01N33/577;G01N33/543;G01N33/531;G;G01;G01N;G01N33;G01N33/68;G01N33/577;G01N33/543;G01N33/531
申请人地址：	325000 浙江省温州市瓯海娄桥工业园区森茂路28号
主权项：	1.一种IV型胶原蛋白的检测试剂盒，包括有试剂R1和试剂R2，其特征在于：所述的试剂1与试剂2的体积比为3:1；所述的试剂R1包括以下组分： pH6.0-6.5的醋酸盐缓冲液 50mmol/L 牛血清白蛋白 0.9g/L 叠氮钠 0.01％所述的试剂R2包括以下组分：所述的Ⅳ型胶原蛋白抗体胶乳颗粒为通过组合型偶联剂，将Ⅳ型胶原蛋白抗体交联于羧基胶乳微球上，形成Ⅳ型胶原蛋白抗体胶乳颗粒；所述的组合型偶联剂包括有以下组分：碳二亚胺、O-苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲四氟硼酸和O-苯并三氮唑-四甲基脲六氟磷酸盐三者质量比为1.2﹕1.2﹕1。 2.一种如权利要求1所述的检测试剂盒的制备方法，其特征在于包括以下步骤： (1)Ⅳ型胶原蛋白抗体胶乳颗粒的制备，包括以下子步骤 (1.1)用50mmol/L，pH6.0-6.5醋酸盐缓冲液悬浮10％(w/v)且粒径100-200nm羧基胶乳微球，室温搅拌30min混合均匀，10000rpm转速下离心15min，去除上清液后用50mmol/L，pH6.0-6.5醋酸盐缓冲液重悬浮，室温搅拌30min混合均匀，使其质量体积浓度为2％； (1.2)取上述悬浮微球，边室温搅拌，边加入组合偶联剂；该组合偶联剂的成分为碳二亚胺、O-苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲四氟硼酸和O-苯并三氮唑-四甲基脲六氟磷酸盐；其对应质量比例为微球溶液﹕碳二亚胺﹕O-苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲四氟硼酸﹕O-苯并三氮唑-四甲基脲六氟磷酸盐＝10﹕1.2﹕1.2﹕1； O-苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲四氟硼酸和O-苯并三氮唑-四甲基脲六氟磷酸盐在加入前分别用1％醋酸溶液37℃超声10min溶解完全；加入顺序为先加入碳二亚胺室温搅拌20min，再同时加入含O-苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲四氟硼酸的醋酸溶液与含O-苯并三氮唑-四甲基脲六氟磷酸盐的醋酸溶液，室温搅拌30min； (1.3)用50mmol/L，pH6.0-6.5醋酸盐缓冲液溶解鼠抗人Ⅳ型胶原蛋白单克隆抗体，使其浓度为5mg/ml； (1.4)边搅拌边快速将上述溶解后的抗体按照体积比抗体﹕胶乳微球＝1﹕5加入到经过处理的胶乳微球中，室温持续搅拌30min后，调pH至6.5，室温孵育3h； (1.5)孵育完成后在10000rpm转速下离心10min，去除上清液，用50mmol/L、pH6.0-6.5醋酸盐缓冲液洗涤，再次10000rpm转速下离心10min，重复6次，完成最后一次离心，去上清液后用50mmol/L、pH6.0-6.5醋酸盐缓冲液重悬浮，室温搅拌1h混合均匀，使其质量体积浓度为1％； (1.6)加入3％质量体积浓度的牛血清白蛋白室温持续搅拌30min，静置封闭24h； (1.7)时间到后，将封闭好的胶乳微球在10000rpm转速下离心10min，去除上清液，用50mmol/L，pH6.0-6.5醋酸盐缓冲液洗涤，再次在10000rpm转速下离心10min，重复2次，用50mmol/L、pH6.0-6.5醋酸盐缓冲液重悬浮，室温搅拌1h混合均匀，得到质量体积浓度为1％的Ⅳ型胶原蛋白抗体胶乳颗粒； (2)按照试剂R1和试剂R2的组分比例配置双试剂。
所属类别：	发明专利