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原文传递一种Ⅳ型胶原蛋白检测试剂盒的制备方法

专利名称：	一种Ⅳ型胶原蛋白检测试剂盒的制备方法
摘要：	本发明公开了一种Ⅳ型胶原蛋白检测试剂盒的制备方法，包括如下步骤：(1)按试剂R1组分含量，配制MOPSO缓冲液，调pH，作为R1缓冲液；将NaCl、NaN₃、阿拉伯胶、Tween‑80、PEG‑2000溶于R1缓冲液，得试剂R1；(2)按试剂R2组分含量，配制MOPSO缓冲液，调pH，作为R2缓冲液；将NaCl、NaN₃、BSA、甘油溶于R2缓冲液，得R2分散液；制备胶乳包被的Ⅳ型胶原蛋白多克隆抗体；用R2分散液溶解胶乳包被的Ⅳ型胶原蛋白多克隆抗体，得试剂R2。本发明的优点为：操作简单、快速，成本低、无污染；试剂盒灵敏度好、准确度高、线性范围宽；试剂盒稳定性佳、特异性强；适合全自动测试。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	安徽;34
申请人：	安徽伊普诺康生物技术股份有限公司
发明人：	吴铮;丁先骏;吴泽东;庄庆华;张金东
专利状态：	有效
发布日期：	2019-01-01T00:00:00+0800
申请号：	CN201710915573.0
公开号：	CN107782890A
代理机构：	合肥市浩智运专利代理事务所(普通合伙) 34124
代理人：	王志兴
分类号：	G01N33/531(2006.01)I;G01N33/543(2006.01)I;G01N33/68(2006.01)I;G;G01;G01N;G01N33;G01N33/531;G01N33/543;G01N33/68
申请人地址：	236000 安徽省合肥市包河经济开发区繁华大道与吉林路交口东南角联东U谷第一期18号楼1-4层
主权项：	一种Ⅳ型胶原蛋白检测试剂盒的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)按照下列组分含量配制试剂R1：试剂R1：①按照上述试剂R1的组分含量，配制MOPSO缓冲液，并用稀盐酸或氢氧化钠调节pH，作为R1缓冲液；②按照上述试剂R1的组分含量，将NaCl、NaN₃、阿拉伯胶、Tween‑80、PEG‑2000溶于R1缓冲液中，搅拌均匀，待所有原料充分溶解，即制得试剂R1；(2)按照下列组分含量配制试剂R2：试剂R2：①按照上述试剂R2的组分含量，配制MOPSO缓冲液，并用稀盐酸或氢氧化钠调节pH，作为R2缓冲液；②按照上述试剂R2的组分含量，将NaCl、NaN₃、BSA、甘油溶于R2缓冲液中，搅拌均匀，即得R2分散液；③制备胶乳包被的Ⅳ型胶原蛋白多克隆抗体：a.取粒径为80nm和120nm的胶乳微球于MES缓冲液中，加入EDAC溶液混匀后于37℃环境中孵育混匀1h，离心去上清；再加入NHS溶液恢复至原体积后，混匀于37℃环境中孵育混匀1h，离心去上清，得混合微球乳液；b.在混合微球乳液中加入上述组分含量的聚乙烯对氯甲基苯乙烯共聚物，在37℃温度下反应1‑3h，共聚80nm和120nm粒径的胶乳；离心沉淀，将剩余物质分散于MES缓冲液中，反复2‑4次，最后于MES缓冲液中恢复至原体积，再加入Ⅳ型胶原蛋白多克隆抗体，于37℃下反应3‑4h，离心，将沉淀物分散于原体积的PBS缓冲液中，反复2‑4次，最后将沉淀物分散于原体积的NHS缓冲液中，加入BSA；c.2‑8℃封存45‑50h，得最终所需的胶乳包被的Ⅳ型胶原蛋白多克隆抗体；④用R2分散液来溶解得到的胶乳包被的Ⅳ型胶原蛋白多克隆抗体，超声分散，最终制得试剂R2；其中，聚乙烯对氯甲基苯乙烯共聚物在试剂R2中的最终浓度为9％‑11％。
所属类别：	发明专利

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