详情

原文传递一种联合型代谢标志物的筛选方法及应用

专利名称：	一种联合型代谢标志物的筛选方法及应用
摘要：	本发明属于肝癌标志物筛选鉴定技术领域，具体涉及一种联合型代谢标志物的筛选方法及应用。为解决现有技术不能及早诊断肝癌的缺点，从而针对性地评价肝癌的发病进程，提供了一种联合型代谢标志物的筛选方法及应用。本发明联合型代谢标志物为马尿酸、肌酸、腐胺、胆碱和牛磺酸的组合，本发明联合型代谢标志物源于尿液。本发明联合型代谢标志物可用于在制备肝癌病变进程诊断鉴别试剂中。本发明通过检测终端产物尿液中内源性生物标志物含量的动态变化过程，筛选能反映肝癌病变进程的生物标志物，目的是解决当前对肝癌病变进程诊断不及时的问题，最终依据确定的进展性标志物对肝癌模型早期病变及病程进行评价。
专利类型：	发明专利
申请人：	山西大学
发明人：	高丽;王柯欣;杜冠华;秦雪梅
专利状态：	有效
申请日期：	1900-01-20T06:00:00+0805
发布日期：	1900-01-20T15:00:00+0805
申请号：	CN202010008952.3
公开号：	CN111157563A
代理机构：	太原申立德知识产权代理事务所(特殊普通合伙)
代理人：	程园园
分类号：	G01N24/08;G;G01;G01N;G01N24;G01N24/08
申请人地址：	030006 山西省太原市坞城路92号
主权项：	1.一种联合型代谢标志物，其特征在于：由马尿酸、肌酸、腐胺、胆碱和牛磺酸共同构成。 2.根据权利要求1所述的一种联合型代谢标志物，其特征在于：所述联合型代谢标志物来源于尿液。 3.一种联合型代谢标志物的筛选方法，其特征在于：包括以下步骤：步骤1，二乙基亚硝胺肝癌模型的复制与评价：将大鼠随机分为空白对照组与二乙基亚硝胺肝癌模型组，肝癌模型组大鼠自由饮用60mg/L由灭菌水配置的二乙基亚硝胺溶液，每天按照饮用情况更换，建立原发性肝癌大鼠模型；通过肝组织病理切片与肝功指标进行二乙基亚硝胺肝癌模型评价；步骤2，差异代谢物的寻找：在不同时间段收集各组大鼠的尿液样品，对尿液进行核磁共振分析，归属代谢物；同时收集不同时间段各组大鼠血清样品进行肝功指标测定；核磁图谱转换为数据矩阵，导入到SIMCA-P软件进行差异代谢物的寻找；步骤3，通过计算各差异代谢物的变化率，并结合主成分分析、累计方差贡献率分析方法，确定肝癌病变进程的进展性标志物；步骤4，通过ROC曲线下面积，评估进展性标志物的诊断准确性，对于曲线下面积大于0.7的进展性标志物，作为反映肝癌病变进程的代谢标志物。 4.根据权利要求3所述的一种联合型代谢标志物的筛选方法，其特征在于：所述步骤2，差异代谢物的寻找：在不同时间段收集各组大鼠的尿液样品，对尿液进行核磁共振分析，归属代谢物；同时收集不同时间段各组大鼠血清样品进行肝功指标测定；核磁图谱转换为数据矩阵，导入到SIMCA-P软件进行差异代谢物的寻找的具体操作方法为：对所有图谱中以TSP校准化学位移，以δ0.01对化学位移区间δ0.30-9.50进行分段积分，排除δ4.70-5.00区域的水峰不进行积分，并将积分数据进行归一化；最终导出积分数据矩阵；对不同时间空白对照组与二乙基亚硝胺肝癌模型组尿液代谢轮廓数据进行偏最小二乘法判别分析和正交偏最小二乘法判别分析，对OPLS-DA结果进行分析，得到VIP值，选出VIP＞1的代谢产物，依据S-plot图并结合独立样本t检验P＜0.05筛选出差异代谢物。 5.根据权利要求3所述的一种联合型代谢标志物的筛选方法，其特征在于：所述步骤3，通过计算各差异代谢物的变化率，并结合主成分分析、累计方差贡献率分析方法，确定肝癌病变进程的进展性标志物的具体操作方法为：以不同时间点为横坐标，以各差异代谢物相对含量的变化率为纵坐标，分别对各差异代谢物进行线性回归分析，选择实验进程中变化趋势一致的差异代谢物，作为潜在进展性标志物；以潜在进展性标志物为变量进行PCA分析，依据各潜在进展性标志物的累计方差贡献率达到100％，筛选出主要的主成分贡献变量，进一步筛选出潜在进展性标志物。 6.根据权利要求5所述的一种联合型代谢标志物的筛选方法，其特征在于：所述以潜在进展性标志物为变量进行PCA分析，依据各潜在进展性标志物的累计方差贡献率达到100％，筛选出主要的主成分贡献变量，进一步筛选出潜在进展性标志物的具体过程为：以整个实验周期中变化趋势一致的潜在进展性标志物为变量进行PCA分析，依据各潜在进展性标志物在不同因子上的载荷，选择载荷值>0.80，得出牛磺酸、胆碱、腐胺、肌酸和马尿酸为主要的主成分贡献变量，可作为潜在进展性标志物。 7.一种联合型代谢标志物的应用，其特征在于：应用于制备肝癌病变进程诊断鉴别试剂中。
所属类别：	发明专利