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原文传递蛋鸡低骨密度联合诊断血清代谢标志物的筛选方法及其应用

专利名称：	蛋鸡低骨密度联合诊断血清代谢标志物的筛选方法及其应用
摘要：	本发明公开了一种筛选蛋鸡低骨密度血清代谢标志物的方法，以及从老年笼养蛋鸡中筛选得到的一组用于联合诊断低骨密度的血清代谢标志物，所述标志物包括与骨密度正相关的七种代谢物和与骨密度负相关的一种代谢物。本发明可通过检测蛋鸡血清或血浆中这八种代谢标志物联合预测笼养蛋鸡低骨密度的风险，进而实现笼养蛋鸡骨质疏松症的有效预防，在蛋鸡养殖行业提高经济效益及动物福利方面具有重要意义。
专利类型：	发明专利
申请人：	华中农业大学
发明人：	周忠新;黄杰;戴小方
专利状态：	有效
申请日期：	1900-01-20T17:00:00+0805
发布日期：	1900-01-20T00:00:00+0805
申请号：	CN202010052205.X
公开号：	CN111208229A
代理机构：	武汉智嘉联合知识产权代理事务所(普通合伙)
代理人：	徐绍新
分类号：	G01N30/02;G01N30/86;G;G01;G01N;G01N30;G01N30/02;G01N30/86
申请人地址：	430070 湖北省武汉市洪山区狮子山街1号
主权项：	1.一种筛选蛋鸡低骨密度联合诊断血清代谢标志物的方法，其特征在于包括以下步骤：步骤1，收集正常骨密度和低骨密度蛋鸡的血清或血浆样本；步骤2，采用液相色谱-质谱联用代谢组学方法对采集的样本进行分析，得到各样本的原始质谱数据；步骤3，使用代谢组学处理软件对原始质谱数据进行预处理，得到包含质荷比、保留时间和质谱峰强度/峰面积等代谢物信息的二维矩阵，用于下一步统计分析；步骤4，将步骤3中得到的二维矩阵依次进行主成分分析和正交-偏最小二乘法判别分析，得到多维统计分析OPLS-DA模型；步骤5，在多维统计分析OPLS-DA模型中应用不同的筛选标准，比如变量投影重要度大于1.0及单维统计分析的P值小于0.05，得到初步差异代谢物；步骤6，在步骤5得到的初步差异代谢物的基础上，结合初步差异代谢物的一级质谱信息、准分子离子信息、加合峰信息和同位素分布，计算差异代谢物的分子量和分子式，考察代谢物的二级质谱信息，与数据库上的比对确定其结构，部分代谢物进一步采用标准品进行确认；步骤7，对步骤6中确定的差异代谢物进行与蛋鸡骨密度的相关性分析，选取P值小于0.05的差异代谢物进行下一步分析；步骤8，对步骤7中P值小于0.05的差异代谢物进行受试者工作特征曲线分析，选取曲线下面积大于0.80的作为候选血清代谢标志物。 2.一组用于蛋鸡低骨密度联合诊断血清代谢标志物，其特征在于：所述代谢标志物包括与骨密度正相关的七种代谢物，即牛磺酸(Taurine)、尿苷(Uridine)、棕榈酸(Palmiticacid)、肾上腺酸(Adrenic Acid)、非索非那定(Fexofenadine)、溶血磷脂酰胆碱(LysoPC(18:1))、溶血磷脂酰乙醇胺(LysoPE(20:3/0:0))，以及与骨密度负相关的一种代谢物，即3-乙酰基-11-酮-β-乳香酸(3-Acetyl-11-keto-beta-boswellic acid)。 3.一种非诊断目的检测蛋鸡血清或血浆中八种代谢标志物的方法，其特征在于：所述八种代谢标志物包括与骨密度正相关的七种代谢物，即牛磺酸(Taurine)、尿苷(Uridine)、棕榈酸(Palmitic acid)、肾上腺酸(Adrenic Acid)、非索非那定(Fexofenadine)、溶血磷脂酰胆碱(LysoPC(18:1))、溶血磷脂酰乙醇胺(LysoPE(20:3/0:0))，以及与骨密度负相关的一种代谢物，即3-乙酰基-11-酮-β-乳香酸(3-Acetyl-11-keto-beta-boswellic acid)，所述检测方法包括将蛋鸡血清或血浆样本经提取后采用液相色谱-质谱联用进行分析的步骤。 4.如权利要求3所述的方法，其特征在于：所述液相色谱的固定相为UPLC BEH Amide色谱柱，流动相A为25mM乙酸铵及25mM氨水混合溶液，流动相B为乙腈，采用梯度洗脱，进样体积为2μL，流速为500μL/min。 5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述梯度洗脱程序如下： 6.如权利要求3所述的方法，其特征在于所述质谱的条件为：轰击能量：30eV，15张二级谱图每50ms，ESI离子源参数设置如下：雾化气压：60Psi，辅助气压：60Psi，气帘气压：35Psi，温度：600℃，喷雾电压：5000V(正离子模式)或-4000V(负离子模式)。
所属类别：	发明专利