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原文传递一种p53自身抗体检测试剂盒及其应用

专利名称：	一种p53自身抗体检测试剂盒及其应用
摘要：	本发明公开了一种p53自身抗体检测试剂盒，包括辣根过氧化物酶标记多肽、蛋白AGL琼脂糖磁珠、血清稀释液、TBST缓冲液、50％二甲基亚砜水溶液、3,3’,5,5’‑四甲基联苯胺底物溶液、反应终止液；多肽的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。采用辣根过氧化物酶标记特异性强的多肽抗原，可与血清中自身抗体充分、有效结合，并采用蛋白AGL琼脂糖磁珠俘获、定量自身抗体，检测灵敏度高，非特异性本底弱，便于自动化检测，特别适用于肿瘤早期自身抗体筛查。本发明还公开了一种上述试剂盒在肺癌p53自身抗体检测中的应用，检测特异性强，灵敏度高、假阴性率低，成本低廉，操作简便，更有利于自动化、大样本筛查技术的实现。
专利类型：	发明专利
申请人：	浙江省肿瘤医院
发明人：	凌志强
专利状态：	有效
申请日期：	1900-01-20T08:00:00+0805
发布日期：	1900-01-20T19:00:00+0805
申请号：	CN202010017406.6
公开号：	CN111175505A
代理机构：	广州市越秀区哲力专利商标事务所(普通合伙)
代理人：	杨艳
分类号：	G01N33/574;G;G01;G01N;G01N33;G01N33/574
申请人地址：	310022 浙江省杭州市拱墅区半山东路1号
主权项：	1.一种p53自身抗体检测试剂盒，其特征在于，包括：辣根过氧化物酶标记多肽、蛋白AGL琼脂糖磁珠、血清稀释液、TBST缓冲液、50％二甲基亚砜水溶液、3,3’,5,5’-四甲基联苯胺底物溶液、反应终止液；所述多肽的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。 2.根据权利要求1所述的p53自身抗体检测试剂盒，其特征在于，所述辣根过氧化物酶标记多肽是通过碘酸钠法制备而得的。 3.根据权利要求1所述的p53自身抗体检测试剂盒，其特征在于，所述血清稀释液为含1％脱脂奶粉的TBST缓冲液；所述反应终止液为2mol/L的硫酸溶液。 4.根据权利要求1所述的p53自身抗体检测试剂盒，其特征在于，所述血清稀释液与待测血清用量的体积比为(9-11)：1。 5.根据权利要求1所述的p53自身抗体检测试剂盒，其特征在于，还包括非特异性本底对照液，所述非特异性本底对照液包括多肽溶液。 6.根据权利要求5所述的p53自身抗体检测试剂盒，其特征在于，所述多肽溶液是通过将所述多肽溶解在所述50％二甲基亚砜水溶液中配制而得的。 7.根据权利要求6所述的p53自身抗体检测试剂盒，其特征在于，按mg/ml计，所述多肽的质量与所述50％二甲基亚砜水溶液的体积比为5:1。 8.根据权利要求5所述的p53自身抗体检测试剂盒，其特征在于，所述非特异性本底对照液用于检测所述试剂盒的非特异性本底，包括以下步骤： 1)将待测血清与血清稀释液混合，得到稀释血清；然后向所述稀释血清中加入辣根过氧化物酶标记多肽和多肽溶液，室温下温育2-3h； 2)将步骤1)温育后的混合物加入到沉降体积为30-35μL的蛋白AGL琼脂糖磁珠中，室温下温育2-3h，TBST缓冲液清洗，然后向蛋白AGL琼脂糖磁珠中加入3,3’,5,5’-四甲基联苯胺底物液，反应15-20min后检测上清的450nm OD值。 9.根据权利要求8所述的p53自身抗体检测试剂盒，其特征在于，所述稀释血清、辣根过氧化物酶标记多肽、多肽溶液的体积比为(200-250)：1：(2-3)。 10.一种权利要求1–9任意一项所述的p53自身抗体检测试剂盒在肺癌p53自身抗体检测中的应用。
所属类别：	发明专利