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原文传递一种测定番茄有机酸和酸性氨基酸混合物的高效液相色谱方法

专利名称：	一种测定番茄有机酸和酸性氨基酸混合物的高效液相色谱方法
摘要：	本发明提供了一种测定番茄有机酸和酸性氨基酸混合物的高效液相色谱方法，该检测方法能同时对苹果酸、柠檬酸、奎尼酸、琥珀酸、α‑酮戊二酸5种有机酸和谷氨酸1种酸性氨基酸进行定性、定量，所需样品量较少，仅需要0.1g甚至更少样品即可进行精确检测；同时检测步骤少，简单快捷，重现性较好，降低了实验误差并提高了数据的准确性。
专利类型：	发明专利
申请人：	深圳大学
发明人：	黄腾波;邱琦芸;李紫薇
专利状态：	有效
申请日期：	1900-01-20T12:00:00+0805
发布日期：	1900-01-20T19:00:00+0805
申请号：	CN202010088660.5
公开号：	CN111175409A
代理机构：	深圳中一联合知识产权代理有限公司
代理人：	黄志云
分类号：	G01N30/02;G01N30/86;G;G01;G01N;G01N30;G01N30/02;G01N30/86
申请人地址：	518000 广东省深圳市南山区南海大道3688号
主权项：	1.一种测定番茄有机酸和酸性氨基酸混合物的高效液相色谱方法，其特征在于，包括如下步骤：配制苹果酸标准品、柠檬酸标准品、奎尼酸标准品、谷氨酸标准品、琥珀酸标准品、α-酮戊二酸标准品的混合标准溶液，将所述混合标准溶液进行高效液相色谱检测得到标准图谱，并制作标准曲线，获取各标准品的回归方程；配制番茄待测品；将所述番茄待测品在与所述混合标准溶液相同的检测条件下进行高效液相色谱检测，获得所述番茄待测品的色谱图，根据所述番茄待测品的色谱图的保留时间确定苹果酸、柠檬酸、奎尼酸、谷氨酸、琥珀酸、α-酮戊二酸的种类，并根据各种类的色谱峰面积计算得到所述番茄待测品中苹果酸、柠檬酸、奎尼酸、谷氨酸、琥珀酸、α-酮戊二酸的含量。 2.根据权利要求1所述的测定番茄有机酸和酸性氨基酸混合物的高效液相色谱方法，其特征在于，所述高效液相色谱检测的条件如下：检测器为岛津LC-16液相色谱仪检测器；色谱柱为C18色谱柱；柱温为30-50℃；流动相溶液为pH 2.53的含0.5％甲醇的0.01M KH2PO4溶液；洗脱时间为15～20min；检测波长为210nm。 3.根据权利要求2所述的测定番茄有机酸和酸性氨基酸混合物的高效液相色谱方法，其特征在于，所述流动相溶液的配制方法如下：将KH2PO4溶解于超纯水中，加入甲醇混合得到第一混合液；调节所述第一混合液的pH为2.53后，进行定容得到所述流动相溶液。 4.据权利要求3所述的测定番茄果实中可溶性糖的的高效液相色谱方法，其特征在于，所述高效液相色谱检测的条件如下：所述C18色谱柱的规格为5μm，4.6×250mm；进样量为10-30μL；洗脱流速为0.5～0.7mL/min。 5.根据权利要求1～4任一所述的测定番茄有机酸和酸性氨基酸混合物的高效液相色谱方法，其特征在于，配置番茄待测品的步骤中，包括如下方法：提供番茄样品，收集所述番茄样品的果肉；将所述果肉加入超纯水进行混合得到第一混合物，将所述第一混合物进行加热处理后进行离心处理，收集第一混合物上清液；将所述第一混合物上清液进行冻干处理，得到第一提取物；将所述第一提取物加入超纯水进行混合、过滤得到所述番茄待测品。 6.根据权利要求5所述的测定番茄有机酸和酸性氨基酸混合物的高效液相色谱方法，其特征在于，将所述果肉加入超纯水进行混合得到第一混合物的步骤中，所述第一混合物的浓度为5～10mg/mL。 7.根据权利要求5所述的测定番茄有机酸和酸性氨基酸混合物的高效液相色谱方法，其特征在于，将所述第一混合物进行加热处理的步骤中，所述加热处理的温度为70～80℃，加热处理的时间为30～40分钟。 8.根据权利要求5所述的测定番茄有机酸和酸性氨基酸混合物的高效液相色谱方法，其特征在于，将所述第一混合物进行加热处理后进行离心处理的步骤中，所述离心处理的条件为：离心处理的转速为10000rcf～12000rcf；离心处理的时间为20～25分钟。 9.根据权利要求1～4任一所述的测定番茄有机酸和酸性氨基酸混合物的高效液相色谱方法，其特征在于，将所述混合标准溶液进行高效液相色谱检测得到标准图谱，并制作标准曲线，获取各标准品的回归方程的步骤中，将所述混合标准溶液进行逐级稀释，配制至少5种不同浓度的混合标准稀释液，将所述不同浓度的混合标准稀释液进行高效液相色谱检测器检测并得到标准图谱，通过所述标准图谱中的保留时间确定各标准品的种类，以各标准品的峰面积与对应的各标准品的浓度制作标准曲线，获取各标准品的回归方程。 10.根据权利要求1所述的测定番茄有机酸和酸性氨基酸混合物的高效液相色谱方法，其特征在于，包括如下步骤：配制苹果酸标准品、柠檬酸标准品、奎尼酸标准品、谷氨酸标准品、琥珀酸标准品、α-酮戊二酸标准品的混合标准溶液，将所述混合标准溶液进行逐级稀释，配制5mg/mL、4mg/mL、2mg/mL、1mg/mL、0.5mg/mL、0.25mg/mL、0.125mg/mL、0.0625mg/mL8种不同浓度的混合标准稀释液，将所述不同浓度的混合标准稀释液进行高效液相色谱检测并得到标准图谱，并制作标准曲线，获取各标准品的回归方程；其中，所述色谱条件如下：检测器为岛津LC-16液相色谱仪检测器；色谱柱选用C18色谱柱；柱温为30～50℃；进样量为10～30μL；流动相溶液为pH 2.53的含0.5％甲醇的0.01M KH2PO4溶液；洗脱时间为15～20min；洗脱流速为0.5～0.7mL/min；提供番茄样品，收集所述番茄样品的果肉；将所述果肉加入超纯水进行萃取得到第一混合物，将所述第一混合物进行加热处理后进行离心处理，收集第一混合物上清液；将所述第一混合物上清液进行浓缩处理，得到第一提取物；将所述第一提取物加入超纯水进行混合、过滤得到所述番茄待测品；将所述番茄待测品在与所述混合标准溶液相同的检测条件下进行高效液相色谱检测，获得所述番茄待测品的色谱图，根据所述番茄待测品的色谱图的保留时间确定苹果酸、柠檬酸、奎尼酸、谷氨酸、琥珀酸、α-酮戊二酸的种类，并根据各种类的色谱峰面积计算得到所述番茄待测品中苹果酸、柠檬酸、奎尼酸、谷氨酸、琥珀酸、α-酮戊二酸的含量。
所属类别：	发明专利