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原文传递一种磁微粒化学发光法人皮质醇测定试剂盒及使用方法

专利名称：	一种磁微粒化学发光法人皮质醇测定试剂盒及使用方法
摘要：	本发明公开了医疗器械生物类免疫体外诊断相关技术领域的一种磁微粒化学发光法人皮质醇测定试剂盒及使用方法；包括相互独立包装的磁分离试剂、生物素化Cortisol单克隆抗体、碱性磷酸酶标记Cortisol衍生物、校准品和质控品；制备方法简单方便；整个反应体系反应时间短，避免了放射性污染，灵敏度高，测试结果准确，简化了实验操作流程；亲和素与生物素间的结合具有极高的亲和力，其反应呈高度专一性，在提高灵敏度的同时，并不增加非特异性干扰；而且结合特性不会因反应试剂的高度稀释而受影响，使其在实际应用中可最大限度地降低反应试剂的非特异作用；延长了试剂效期，避免浪费，有效节约成本。
专利类型：	发明专利
申请人：	江苏泽成生物技术有限公司
发明人：	邵飞飞;刘振世
专利状态：	有效
申请日期：	1900-01-20T00:00:00+0805
发布日期：	1900-01-20T19:00:00+0805
申请号：	CN202010124921.4
公开号：	CN111175493A
代理机构：	上海联科律师事务所
代理人：	赵旭
分类号：	G01N33/543;G01N33/577;G01N33/535;G;G01;G01N;G01N33;G01N33/543;G01N33/577;G01N33/535
申请人地址：	214400 江苏省无锡市江阴市东盛西路6号(扬子江生物医药加速器A4-1)
主权项：	1.一种磁微粒化学发光法人皮质醇测定试剂盒，其特征在于：包括相互独立包装的磁分离试剂、生物素化Cortisol单克隆抗体、碱性磷酸酶标记Cortisol衍生物、校准品和质控品； A、所述生物素化Cortisol单克隆抗体通过包括以下步骤的操作制备而成： Sa1：准确称量0.3～0.5mg生物素-NHS并用DMSO溶解至终浓度为4.5～5.5mg/ml，制得生物素-NHS的DMSO溶液； Sa2：准确称量0.9～1.1mgCortisol单克隆抗体并加入所述生物素-NHS的DMSO溶液中，充分混匀后室温反应1.5～2.5h； Sa3：用透析袋对Sa2中反应产物进行透析处理； Sa4：用抗试剂缓冲液将Sa3制得的混合物稀释至0.45～0.55μg/ml即得； B、所述碱性磷酸酶标记Cortisol衍生物通过包括以下步骤的操作制备而成： Sb1：将检测Cortisol衍生物进行透析处理后用2-IT进行活化； Sb2：将碱磷酶用SMCC进行活化； Sb3：将活化后的所述检测Cortisol衍生物和所述碱磷酶混合后在2～8℃反应16～20h； Sb4：将Sb3制备的反应物用层析柱进行纯化，收集I峰II峰并混合，制得抗体-碱磷酶； Sb5：用抗试剂缓冲液将所述抗体-碱磷酶稀释至0.09～0.11μg/ml即得； C、所述校准品和所述质控品的成分相同，且均通过包括用Cortisol校准品缓冲液将Cortisol纯品稀释的操作制备而成。 2.根据权利要求1所述的磁微粒化学发光法人皮质醇测定试剂盒，其特征在于：所述Cortisol单克隆抗体为鼠Cortisol单克隆抗体。 3.根据权利要求1所述的磁微粒化学发光法人皮质醇测定试剂盒，其特征在于：所述Cortisol单克隆抗体与所述生物素-NHS的摩尔比为1：20。 4.根据权利要求1所述的磁微粒化学发光法人皮质醇测定试剂盒，其特征在于：Sa3中所述透析袋的截留分子量为500。 5.根据权利要求1所述的磁微粒化学发光法人皮质醇测定试剂盒，其特征在于：Sa3中透析处理所用的透析缓冲液为pH为7.5的0.15M的PBS缓冲液。 6.根据权利要求1所述的磁微粒化学发光法人皮质醇测定试剂盒，其特征在于：Sb1中透析处理所用的透析缓冲液为0.1M的PBS缓冲液。 7.根据权利要求1所述的磁微粒化学发光法人皮质醇测定试剂盒，其特征在于：所述Cortisol校准品缓冲液通过向0.05M的PH为7.4的TRIS缓冲液中加入牛血清白蛋白和防腐剂制备而成，所述Cortisol校准品缓冲液中所述牛血清白蛋白的体积百分比为0.5％，所述防腐剂的体积百分比为0.2％。 8.根据权利要求1所述的磁微粒化学发光法人皮质醇测定试剂盒，其特征在于：所述Cortisol纯品稀释的最终浓度为0ug/ml、2.5ug/ml、5ug/ml、10ug/ml、25ug/ml和60ug/ml。 9.根据权利要求1所述的磁微粒化学发光法人皮质醇测定试剂盒，其特征在于：所述磁分离试剂为链霉亲和素磁珠。 10.一种如权利要求1～9任一项所述的磁微粒化学发光法人皮质醇测定试剂盒的使用方法，其特征在于：包括以下步骤： Sd1：准确称取待检测样本30μL、所述生物素化Cortisol单克隆抗体30μL和所述碱性磷酸酶标记Cortisol衍生物30μL充分混合并在37℃条件下孵育30min； Sd2：向Sd1制得的反应物中加入所述磁分离试剂30μL充分混合并孵育5min； Sd3：对Sd2制得的反应物磁分离2min，去除上清保留底物； Sd4：对所述底物洗涤3次，每次用300μL洗液； Sd5：用200μL所述Cortisol校准品缓冲液将所述底物稀释后用全自动发光分析仪测值。
所属类别：	发明专利