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原文传递一种甲状腺球蛋白抗体检测试剂盒及其使用方法

专利名称：	一种甲状腺球蛋白抗体检测试剂盒及其使用方法
摘要：	本发明公开了医疗器械生物类免疫体外诊断相关技术领域，特别涉及一种甲状腺球蛋白抗体检测试剂盒及其使用方法；包括相互独立包装的校准品、质控品、抗试剂、磁微粒试剂、发光底物和清洗液；其中抗试剂异硫氰酸荧光素标记的甲状腺球蛋白包被抗原和碱性磷酸酶标记的抗甲状腺球蛋白标记抗体；磁微粒试剂是由磁微粒与羊抗异硫氰酸荧光素抗体偶联制得；将化学发光技术与免疫磁微粒相结合，使得检测灵敏度、精密性大大提高、检测范围扩大，反应时间短；并且可以在全自动化学发光仪上同时测定多个样本，实现甲状腺球蛋白抗体的高通量快速化测定，性能可靠、灵敏度高、线性范围宽，可配合半自动、全自动仪器使用。
专利类型：	发明专利
申请人：	江苏泽成生物技术有限公司
发明人：	张小玉;刘振世;夏振伟
专利状态：	有效
申请日期：	1900-01-20T00:00:00+0805
发布日期：	1900-01-20T19:00:00+0805
申请号：	CN202010124951.5
公开号：	CN111175494A
代理机构：	上海联科律师事务所
代理人：	赵旭
分类号：	G01N33/543;G01N33/533;G01N33/535;G01N33/577;G;G01;G01N;G01N33;G01N33/543;G01N33/533;G01N33/535;G01N33/577
申请人地址：	214400 江苏省无锡市江阴市东盛西路6号(扬子江生物医药加速器A4-1)
主权项：	1.一种甲状腺球蛋白抗体检测试剂盒，其特征在于：包括相互独立包装的校准品、质控品、抗试剂、磁微粒试剂、发光底物和清洗液；所述校准品和所述质控品的组分相同，并均通过包括用含蛋白的缓冲液溶解甲状腺球蛋白抗体，并稀释至含新生牛血清的缓冲液中的操作制备而成：所述抗试剂通过包括以下步骤的操作制备而成： SA：异硫氰酸荧光素标记的甲状腺球蛋白包被抗原的制备： Sa1：用抗试剂缓冲液将异硫氰酸荧光素配制成浓度为1.0～5.0mg/mL的异硫氰酸荧光素溶液； Sa2：按照甲状腺球蛋白抗原与所述异硫氰酸荧光素溶液的质量比为1:1.1～1:1.5的比例在遮光条件下混合； Sa3：用pH为8～9的碳酸盐缓冲液平衡Sa2制得的溶液，然后用凝胶层析分离纯化得到异硫氰酸荧光素标记的甲状腺球蛋白包被抗原； SB：碱性磷酸酶标记的甲状腺球蛋白标记抗体的制备： Sb1：用所述抗试剂缓冲液将碱性磷酸酶配制成浓度为1.0～5.0mg/mL的碱性磷酸酶溶液； Sb2：将碱性磷酸酶和甲状腺球蛋白抗体的反应基团分别活化后按照所述碱性磷酸酶与所述甲状腺球蛋白抗体的摩尔比为1:1～1:3的比例在催化剂的催化下充分混匀进行偶联反应； Sb3：使用pH为8～9的碳酸盐缓冲液平衡Sb2制得的溶液，然后用凝胶柱进行不同分子大小片度的分离纯化，得到碱性磷酸酶标记的甲状腺球蛋白标记抗体； SC：将所述异硫氰酸荧光素标记的甲状腺球蛋白包被抗原与所述碱性磷酸酶标记的甲状腺球蛋白标记抗体加入含有表面活性剂的所述抗试剂缓冲液中，即得；所述磁微粒试剂通过包括以下步骤的操作制备而成： Sd1：将羧基磁珠浓缩液充分混匀后置于磁场中15～20min，待羧基磁珠全部沉降后去除上清； Sd2：向所述羧基磁珠中加入所述羧基磁珠体积2～5倍的磁微粒缓冲液，震荡清洗20～30min；再置于磁场中15～20min后吸去上清； Sd3：将Sd2的操作重复0～3遍； Sd4：用所述磁微粒缓冲液将羧基磁珠定容到10～50mg/mL，混匀制得羧基磁珠缓冲液； Sd5：按照所述羧基磁珠与抗异硫氰酸荧光素抗体的质量比为(90～110)：1的比例，向所述羧基磁珠缓冲液中加入所述抗异硫氰酸荧光素抗体，在混匀状态下2～8℃反应16～20h； Sd6：用磷酸缓冲液将Sd5制得的产物清洗0～3遍后定容至9～11mg/mL即得；所述发光底物通过将试剂ALPS加入所述试剂ALPS体积4～10倍的发光底缓冲液中制备而成。 2.根据权利要求1所述的甲状腺球蛋白抗体检测试剂盒，其特征在于：所述含新生牛血清的缓冲液中包括防腐剂四环素0.01～0.05％和硫酸新霉素0.1～0.5％，所述含新生牛血清的缓冲液经过0.22μm滤膜过滤处理。 3.根据权利要求1所述的甲状腺球蛋白抗体检测试剂盒，其特征在于：所述抗试剂缓冲液在纯化水中包括0.1～0.4mM的Tris盐，还包括按体积百分比计的以下组分：四环素0.01～0.05％、绵羊血清1～5％、新生牛血清3～10％和马血清1～5％；所述抗试剂缓冲液的pH为7～8。 4.根据权利要求1所述的甲状腺球蛋白抗体检测试剂盒，其特征在于：所述表面活性剂为Tween20、TritonX-100、Bronidox中的一种或多种，所述表面活性剂在所述抗试剂缓冲液中的体积百分比为0.01～0.5％。 5.根据权利要求1所述的甲状腺球蛋白抗体检测试剂盒，其特征在于：所述发光底缓冲液中包括Tris0.1～1M，还包括按以下浓度的组分：亚硫酸钠0.1％、SDS1％、光泽精0.3％、牛血清白蛋白0.15％；所述发光底缓冲液的pH为9.5。 6.根据权利要求1所述的甲状腺球蛋白抗体检测试剂盒，其特征在于：所述磁微粒缓冲液为每升纯化水中溶解有12.12～15.26mg的Tris、5.82～8.58mg的氯化钠，50～60g的甲基纤维醚的溶液。 7.根据权利要求1所述的甲状腺球蛋白抗体检测试剂盒，其特征在于：所述清洗液为每升双蒸水中溶解有160gNaCl、4gKCl、24.2g三羟甲基氨基甲烷和1mL吐温20；所述清洗液的pH为7.4。 8.一种如权利要求1～7任一项所述的甲状腺球蛋白抗体检测试剂盒的使用方法，其特征在于：包括以下步骤： Se1：取三支试管分别加30μL所述校准品、30μL所述质控品、30μL待测样本； Se2：向每支试管中加入60μL抗试剂，用塑料薄膜覆盖试管，轻轻振荡试管30s，置于37℃下水浴5min； Se3：再向每支试管中加入30μL所述磁微粒试剂，用塑料薄膜覆盖试管，轻轻振荡试管30s，置37℃下水浴5min； Se4：将所有试管在磁分离器上沉淀2min，缓慢地倒转所述试管和所述磁分离器，倒出上清液；把倒转的所述试管连同所述磁分离器一起，放在滤纸上，拍击所述磁分离器底部除去粘在管壁上的所有液滴； Se5：向每支试管中加入300μL所述清洗液，用塑料薄膜覆盖试管，轻轻振荡试管30s，混匀后缓慢的倒转试管和磁分离器，倒出上清液，把倒转的所述试管连同所述磁分离器一起，放在滤纸上，用力拍击分离器底部以除去粘在管壁上的所有液滴； Se6：重复Se5的操作0～3次； Se7：向每支试管中加入200μL所述发光底物，振荡混匀3s，用化学发光仪检测发光强度。
所属类别：	发明专利