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原文传递一种测定胃泌素17含量的试剂盒及其使用方法

专利名称：	一种测定胃泌素17含量的试剂盒及其使用方法
摘要：	本发明公开了生物化学相关技术领域的一种测定胃泌素17含量的试剂盒及其使用方法，包括校准品、质控品、抗试剂、磁微粒试剂、发光底物；其中抗试剂异硫氰酸荧光素标记的胃泌素17包被抗体和碱性磷酸酶标记的胃泌素17标记抗体；磁微粒试剂为磁微粒与羊抗FITC连接物；本发明将化学发光技术与免疫磁微粒相结合，提供了一种接近均相的反应体系，并且采用了一步法反应模式，使得检测灵敏度、精密性大大提高、检测范围扩大，反应时间大大缩短，从开始加样到检测结果，时间少于35min，明显快于同类试剂盒；并且可以在全自动化学发光仪上同时测定多个样本，实现胃泌素17的高通量快速化测定，准确度高，特异性强，精确度和检测效率有了较大的提高。
专利类型：	发明专利
申请人：	江苏泽成生物技术有限公司
发明人：	沈怡;孙吉莲;刘振世
专利状态：	有效
申请日期：	1900-01-20T00:00:00+0805
发布日期：	1900-01-20T19:00:00+0805
申请号：	CN202010124959.1
公开号：	CN111175495A
代理机构：	上海联科律师事务所
代理人：	赵旭
分类号：	G01N33/543;G01N33/533;G01N33/535;G;G01;G01N;G01N33;G01N33/543;G01N33/533;G01N33/535
申请人地址：	214400 江苏省无锡市江阴市东盛西路6号(扬子江生物医药加速器A4-1)
主权项：	1.一种测定胃泌素17含量的试剂盒，其特征在于：包括校准品、质控品、抗试剂、磁微粒试剂和发光底物；所述校准品、所述质控品、所述抗试剂、所述磁微粒试剂和所述发光底物分别独立地包装；所述校准品通过在1L新生牛血清中加入0.01～0.05g的四环素和0.1～0.5g的硫酸新霉素，完全溶解后经过滤膜处理制备而成；所述质控品通过用所述校准品溶解胃泌素17抗原制备而成；所述抗试剂通过包括如下步骤的操作制备而成： Sa1：将10～20g的Na2PO3H·12H2O、1～2g的NaPO3H2·12H2O、1～5g的绵羊血清、3～10g的新生牛血清、1～5g的马血清加入1L纯化水中，充分搅拌至完全溶解，用HCl调节pH至5～6，制得抗试剂缓冲液； Sa2：用所述抗试剂缓冲液将异硫氰酸荧光素配制成浓度为1.0～5.0mg/mL的异硫氰酸荧光素溶液，向胃泌素17抗体中加入所述胃泌素17抗体质量1.1～1.5倍的所述异硫氰酸荧光素溶液并充分混合，使用pH为8～9的碳酸盐缓冲液平衡，然后使用凝胶层析分离纯化，制得异硫氰酸荧光素标记的胃泌素17包被抗体： Sa3：用所述抗试剂缓冲液将碱性磷酸酶配制成浓度为1.0～5.0mg/mL的碱性磷酸酶溶液，用胃泌素17抗体和碱性磷酸酶分别将反应基团活化后按照摩尔比为所述碱性磷酸酶：所述胃泌素17抗体为1:1～1:3的反应比，在催化剂的催化下充分混匀进行偶联反应，充分反应后，使用Tris缓冲液平衡，凝胶柱进行不同分子大小片度的分离纯化，制得碱性磷酸酶标记的胃泌素17标记抗体； Sa4：将所述异硫氰酸荧光素标记的胃泌素17包被抗体与所述碱性磷酸酶标记的胃泌素17标记抗体加入含有表面活性剂的磷酸盐缓冲液中，充分混合即得；所述磁微粒试剂通过将抗异硫氰酸荧光素抗体与羧基磁珠偶联制备而成；所述发光底物通过将ALPS溶解于发光底物缓冲液中制备而成。 2.根据权利要求1所述的测定胃泌素17含量的试剂盒，其特征在于：还包括清洗液，所述清洗液通过将150～170gNaCl、3～5gKCl、24～24.4g三羟甲基氨基甲烷、0.8～1.2mL吐温20溶于900ml双蒸水中，再用HCl调整至pH7.2～7.6，最后用双蒸水定容至1000ml制备而成。 3.根据权利要求1或2所述的测定胃泌素17含量的试剂盒，其特征在于：Sa4中所述表面活性剂为Tween20、TritonX-100、Bronidox中的一种或多种，所述表面活性剂的添加量为0.01％～0.5％。 4.根据权利要求1或2所述的测定胃泌素17含量的试剂盒，其特征在于：所述磁微粒试剂通过包括如下步骤的操作制备而成： Sb1：将充分混匀后的羧基磁珠浓缩液在磁场内放置15～20min，待羧基磁珠全部沉降后吸去上清，向所述羧基磁珠中加入所述羧基磁珠体积2～5倍的磁微粒缓冲液，震荡清洗20～30min后在磁场内放置15～20min再吸去上清；重复清洗羧基磁珠1～3遍；最后将羧基磁珠混合液定容到10～50mg/mL，制得羧基磁珠溶液； Sb2：向所述羧基磁珠溶液中加入所述羧基磁珠溶液质量0.8％～1.2％的抗异硫氰酸荧光素抗体，在2～8℃内保持混匀状态反应16～20h； Sb3：将Sb2制得的溶液在磁场中放置12～18min，待所述羧基磁珠沉降后用磁微粒缓冲液洗1～3遍，随后定容至8～12mg/mL，2～8℃保存。 5.根据权利要求4所述的测定胃泌素17含量的试剂盒，其特征在于：所述磁微粒缓冲液通过将12.12～15.26mg的Tris、5.82～8.58mg的NaCl和50～60g的甲基纤维醚加入到1L纯化水中，充分搅拌至完全溶解制备而成。 6.根据权利要求1或2所述的测定胃泌素17含量的试剂盒，其特征在于：所述发光底物通过将ALPS体积4～10倍的发光底物缓冲液充分溶解ALPS制备而成；所述发光底物缓冲液通过将12.12～121.14g的Tris、5.82～8.58g的NaCl和0.03～0.05g的光泽精加入到1L纯化水中，充分搅拌至完全溶解，用盐酸调节pH至9.3～9.5制备而成。 7.一种如权利要求1～6任一项所述的测定胃泌素17含量的试剂盒的使用方法，其特征在于：包括以下步骤： Sc1：取三支试管分别加100μL所述校准品、100μL所述质控品、100μL待测样本； Sc2：每支所述试管中加入60μL所述抗试剂，用塑料薄膜覆盖所述试管，轻轻振荡30s，置于37℃下水浴15min； Sc3：每支所述试管中加入30μL所述磁微粒试剂，用所述塑料薄膜覆盖所述试管，轻轻振荡30s，置37℃下水浴5min； Sc4：将所述试管在磁分离器上沉淀3min，缓慢地倒转所述试管和所述磁分离器，倒出上清液；把倒转的所述试管连同所述磁分离器一起，放在滤纸上，拍击所述磁分离器底部以除去粘在所述试管的管壁上的所有液滴； Sc5：每支所述试管中加入200μL所述发光底物，振荡混匀3s，用化学发光仪检测发光强度。 8.根据权利要求7所述的测定胃泌素17含量的试剂盒的使用方法，其特征在于：Sc4操作后还包括Sc4.1：向每支所述试管中加入300μL清洗液，用塑料薄膜覆盖试管，轻轻振荡试管30s，混匀后缓慢的倒转试管和磁分离器，倒出上清液，把倒转的试管连同磁分离器一起，放在滤纸上，用力拍击分离器底部以除去粘在管壁上的所有液滴。 9.根据权利要求8所述的测定胃泌素17含量的试剂盒的使用方法，其特征在于：Sc4.1操作后还包括Sc4.2：重复Sc4.2的操作1～2次。
所属类别：	发明专利