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原文传递一种检测生物样本中的蛋白质复合体的方法

专利名称：	一种检测生物样本中的蛋白质复合体的方法
摘要：	本发明提供一种检测生物样本中的蛋白质复合体的方法，包括共价交联、变性处理、溶液置换、免疫共沉淀和质谱分析步骤。本发明通过变性处理步骤破坏蛋白三维结构而使肽链散开，以减少肽链的空间位阻效应，可以使蛋白质复合体更好地被特异性抗体识别。而且，由于变性处理，埋藏于肽链疏水中心的抗原决定簇暴露出来作为线性表位，可以采用针对线性表位的抗体进行免疫共沉淀，为免疫共沉淀提供了新颖的思路。本发明的检测方法有利于开展蛋白质复合体和蛋白质相互作用的研究。
专利类型：	发明专利
申请人：	深圳华大临床检验中心
发明人：	张可人;任艳;张宇星;林志龙;陈秋实;李思奇;潘火珍;王欣然;张元良
专利状态：	有效
申请日期：	1900-01-20T13:00:00+0805
发布日期：	1900-01-20T22:00:00+0805
申请号：	CN202010033144.2
公开号：	CN111189904A
代理机构：	深圳鼎合诚知识产权代理有限公司
代理人：	罗瑶;彭家恩
分类号：	G01N27/62;G;G01;G01N;G01N27;G01N27/62
申请人地址：	518083 广东省深圳市盐田区盐田街道北山工业区11栋1、3、4、5楼
主权项：	1.一种检测生物样本中的蛋白质复合体的方法，所述蛋白质复合体包含目标蛋白和与所述目标蛋白相互作用的结合蛋白，所述方法包括以下步骤：共价交联：用化学交联剂使所述蛋白质复合体在非蛋白质变性条件下发生共价交联反应，以使所述蛋白质复合体稳定化；变性处理：将所述蛋白质复合体进行蛋白变性处理，以破坏维持蛋白三维结构的弱相互作用力；溶液置换：使经变性处理的蛋白质复合体处于适合进行免疫共沉淀的溶液体系中；免疫共沉淀：使针对所述目标蛋白的特异性抗体与经过溶液置换处理的所述蛋白质复合体进行免疫共沉淀，以捕获所述蛋白质复合体，并通过捕获所述特异性抗体使所述蛋白质复合体与所述生物样本分离，并将所述特异性抗体从所述蛋白质复合体洗脱，得到纯化的所述蛋白质复合体；质谱分析：将纯化的所述蛋白质复合体进行酶解形成肽段，然后进行质谱分析。 2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述蛋白质复合体位于细胞内，所述共价交联反应在所述细胞内原位进行；或者，所述蛋白质复合体在细胞提取液中，所述共价交联反应在所述细胞提取液中进行。 3.根据权利要求1或2所述的检测方法，其特征在于，所述化学交联剂为二琥珀酰亚胺亚砜(DSSO)或二琥珀酰亚胺二丁酸(DSBU)。 4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述变性处理采用化学变性方法或者物理变性方法。 5.根据权利要求4所述的检测方法，其特征在于，所述化学变性方法采用尿素蛋白变性方法、丙酮沉淀方法或者改变缓冲液中的渗透质的方法。 6.根据权利要求5所述的检测方法，其特征在于，所述尿素蛋白变性方法为8M尿素蛋白变性方法。 7.根据权利要求4所述的检测方法，其特征在于，所述物理变性方法采用加热变性方法。 8.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，在所述免疫共沉淀步骤中，所述特异性抗体为针对天然形式的所述目标蛋白的抗体，或者为针对所述目标蛋白中的线性表位的抗体。 9.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，在所述溶液置换步骤中，所述适合进行免疫共沉淀的溶液体系为非变性蛋白裂解液。 10.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述分离纯化步骤使用蛋白A包被的磁珠或蛋白G包被的磁珠来进行。
所属类别：	发明专利