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原文传递一种电化学免疫传感器和制备方法以及电化学免疫分析方法和试剂盒

专利名称：	一种电化学免疫传感器和制备方法以及电化学免疫分析方法和试剂盒
摘要：	本发明公开了一种电化学免疫传感器和制备方法以及电化学免疫分析方法和试剂盒。该电化学免疫传感器为：在打磨抛光的玻碳电极表面电沉积金纳米颗粒，并固载anti－cTnI1和anti－BNP1两种抗体。在ECL检测的过程中，将anti－cTnI2－AuNPs＠ABEI以及anti－BNP2－AuNPs＠g－C3N4两种二抗标记物同步装配到孵育过BNP和cTnI抗原的电化学免疫传感器表面上，随着夹心层cTnI和BNP浓度的升高，显示出随抗原浓度增加而增强的ECL信号，从而实现脑利钠肽(BNP)和心肌肌钙蛋白I(cTnI)的同步多重免疫分析，为急性心肌梗塞的诊断提供了一种有效的方案。
专利类型：	发明专利
申请人：	西南大学
发明人：	陈时洪;杜佳炜;赵晋文;谭兴容
专利状态：	有效
申请日期：	1900-01-20T16:00:00+0805
发布日期：	1900-01-20T07:00:00+0805
申请号：	CN201911297824.9
公开号：	CN110967491A
代理机构：	北京超凡宏宇专利代理事务所(特殊普通合伙)
代理人：	覃蛟
分类号：	G01N33/74;G01N33/68;G01N27/26;G01N27/48;G01N27/30;G;G01;G01N;G01N33;G01N27;G01N33/74;G01N33/68;G01N27/26;G01N27/48;G01N27/30
申请人地址：	400700 重庆市北碚区天生路2号
主权项：	1.一种电化学免疫传感器，其特征在于，所述电化学免疫传感器包括基底电极和所述基底电极表面固载的第一抗体，所述第一抗体包括脑利钠肽抗体和心肌肌钙蛋白I抗体，所述基底电极表面沉积有纳米金颗粒，且脑利钠肽抗体和心肌肌钙蛋白I抗体通过自组装的方法修饰在所述纳米金颗粒表面。 2.一种根据权利要求1所述电化学免疫传感器的制备方法，其特征在于，包括：在基底电极的表面电化学沉积金纳米颗粒后，滴加脑利钠肽抗体溶液和心肌肌钙蛋白I抗体溶液进行共孵育。 3.根据权利要求2所述的电化学免疫传感器的制备方法，其特征在于，在基底电极表面电沉积纳米金颗粒包括以下步骤：所述基底电极经抛光、清洗、吹干后，采用0.2－3wt％的HAuCl4溶液，在所述基底电极的表面以－0.2V的恒定电压电沉积10－50s以在基底电极表面电沉积纳米金颗粒。 4.根据权利要求2所述的电化学免疫传感器的制备方法，其特征在于，滴加脑利钠肽抗体溶液和心肌肌钙蛋白I抗体溶液进行共孵育包括以下步骤：滴加10μg/mL，5－10μL的脑利钠肽抗体溶液和10μg/mL，5－10μL的心肌肌钙蛋白I抗体溶液，于2－8℃下孵育12－16h；优选的，还包括滴加牛血清蛋白封闭所述基底电极表面的非特异性的活性位点：滴加1wt％，5－15μL的牛血清白蛋白溶液，于2－8℃下孵育1h，以封闭基底电极表面的非特异性结合位点，然后用0.05－0.15mol/ml的PBS缓冲液中进行淌洗。 5.一种基于权利要求1所述的电化学免疫传感器或权利要求2－4中任一项所述制备方法制备的电化学免疫传感器的电化学免疫分析方法，其特征在于，至少包括以下步骤：将所述电化学免疫传感器与待检测的脑利钠肽抗原和心肌肌钙蛋白I抗原的样品溶液进行第一次孵育，然后将经过所述第一次孵育的电化学免疫传感器和能够单独与脑利钠肽抗原结合的第二抗体复合物A溶液以及能够单独与心肌肌钙蛋白I抗原结合的第二抗体复合物B溶液进行第二次孵育；且所述第二抗体复合物A中含有石墨相氮化碳纳米片，所述第二抗体复合物B中含有N－(4－氨基丁基)－N－乙基异鲁米诺。 6.根据权利要求5所述的分析方法，其特征在于，所述第二抗体复合物A的组成为：金纳米粒子－石墨相氮化碳纳米片－脑利钠肽抗体，所述第二抗体复合物B的组成为：金纳米粒子－N－(4－氨基丁基)－N－乙基异鲁米诺－心肌肌钙蛋白I抗体；优选的，所述第二抗体复合物A通过以下步骤制备得到：将石墨相氮化碳纳米片悬浮液与HAuCl4溶液混合均匀，加入NaBH4以在石墨相氮化碳纳米片表面原位还原得到金纳米粒子，再加入柠檬酸三纳继续搅拌混合，离心收集金纳米粒子－石墨相氮化碳纳米片；将金纳米粒子－石墨相氮化碳纳米片的悬浮液与脑利钠肽抗体溶液混合并进行孵育；用牛血清白蛋白封闭金纳米粒子表面的非特异性的活性位点；更优选的，控制孵育时石墨相氮化碳纳米片和脑利钠肽抗体的质量比为1000－3000：1，于2－8℃下孵育12－16h；优选的，所述第二抗体复合物B通过以下步骤制备得到：将N－(4－氨基丁基)－N－乙基异鲁米诺溶液与HAuCl4溶液混合均匀，加入NaBH4进行还原得到金纳米粒子，继续搅拌混合，离心收集金纳米粒子－N－(4－氨基丁基)－N－乙基异鲁米诺；将金纳米粒子－N－(4－氨基丁基)－N－乙基异鲁米诺的分散液与心肌肌钙蛋白I抗体溶液混合并进行孵育；用牛血清白蛋白封闭金纳米粒子表面的非特异性的活性位点；更优选的，控制孵育时N－(4－氨基丁基)－N－乙基异鲁米诺和心肌肌钙蛋白I抗体的质量比为2000－4000：1，于2－8℃下孵育12－16h。 7.根据权利要求5所述的分析方法，其特征在于，所述第二抗体复合物A溶液的浓度为1mg/ml，用量为2－8μL，所述第二抗体复合物B溶液的浓度为2mg/ml，用量为2－8μL；优选的，第二次孵育的孵育温度为2－8℃，时间为1.5－3h。 8.根据权利要求5所述的分析方法，其特征在于，所述电化学免疫分析方法还包括：在三电极体系中测量出经过第二次孵育后的所述电化学免疫传感器的电化学发光强度值；根据电化学发光强度值计算待测样品溶液中脑利钠肽抗原浓度和心肌肌钙蛋白I抗原浓度。 9.如权利要求8所述的分析方法，其特征在于，所述电化学发光强度值测量时的检测底液为含有N－(4－氨基丁基)－N－乙基异鲁米诺的共反应试剂溶解氧和石墨相氮化碳纳米片的共反应试剂K2S2O8的磷酸盐缓冲液；优选的，所述磷酸盐缓冲液的浓度为0.1M，用量为2－4mL，pH为7.4，且所述空气饱和条件下的磷酸盐缓冲溶液中K2S2O8的浓度为2－8mM；优选的，所述电化学发光强度值测量时：以300mV/s的扫描速度在－1.5V－0.7V的电位范围内进行检测。 10.一种试剂盒，其包含权利要求1所述的电化学免疫传感器或权利要求2－4中任一项所述的制备方法制备的电化学免疫传感器，以及权利要求5－9中任一项所述分析方法中的第二抗体复合物A和第二抗体复合物B。
所属类别：	发明专利