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原文传递一种血液样本中阿莫西林和克拉维酸同时检测的定量分析方法

专利名称：	一种血液样本中阿莫西林和克拉维酸同时检测的定量分析方法
摘要：	本发明公开了一种血液样本中阿莫西林和克拉维酸同时检测的定量分析方法，采用液相‑质谱联用系统对阿莫西林和克拉维酸进行定量分析。本发明的检测方法可以同时检测血液中阿莫西林和克拉维酸的含量，且精准度高，专属性好，检出限低，能满足阿莫西林和克拉维酸的体内药代动力学检测。
专利类型：	发明专利
申请人：	哈尔滨舒曼德医药科技开发有限公司
发明人：	马春波;岳云霞;陈露;刘杨;金丽娜;李元芃
专利状态：	有效
申请日期：	1900-01-20T17:00:00+0805
发布日期：	1900-01-20T10:00:00+0805
申请号：	CN201911302605.5
公开号：	CN110988242A
分类号：	G01N30/88;G;G01;G01N;G01N30;G01N30/88
申请人地址：	150000 黑龙江省哈尔滨市南岗区红军街7号禧年小区A栋1单元22层2号
主权项：	1.一种血液样本中阿莫西林和克拉维酸同时检测的定量分析方法，其特征在于，采用液相-质谱联用系统对阿莫西林和克拉维酸进行定量分析。 2.如权利要求1所述的阿莫西林和克拉维酸同时检测的定量分析方法，其特征在于，所述的检测方法包括以下步骤：标准样品制备：取空白血液样品，加入系列浓度的标准阿莫西林溶液，得系列阿莫西林标准样品；取空白血液样品，加入系列浓度的标准克拉维酸溶液，得系列克拉维酸标准样品；待测样品制备：实验对象口服阿莫西林克拉维酸钾混悬剂前后，静脉采血，得到待测样品；样品检测：将系列阿莫西林标准样品、系列克拉维酸标准样品和待测样品进行前处理后，采用液相-质谱联用系统进行样品检测；其中，液相检测条件为：流动相A为0.1-1%的乙酸水溶液；流动相B为甲醇溶液，梯度洗脱，流速0.5-1.0mL/min，进样量5-20uL；质谱检测条件为：检测方式为多反应监测MRM，扫描方式为负离子扫描；制作标准曲线：根据系列阿莫西林标准样品的液相-质谱检测结果，绘制阿莫西林标准曲线，得到阿莫西林标准曲线方程，根据系列克拉维酸标准样品的液相-质谱检测结果，绘制克拉维酸的标准曲线，得到克拉维酸标准曲线方程；待测样品定量结果计算：将待测样品的检测结果，代入阿莫西林标准曲线方程，得到待测样品中阿莫西林的含量；将待测样品的检测结果，代入克拉维酸标准曲线方程，得到待测样品中克拉维酸的含量。 3.如权利要求2所述的阿莫西林和克拉维酸同时检测的定量分析方法，其特征在于，所述系列浓度的标准阿莫西林溶液的配制方法为：采用DMSO超声溶解阿莫西林，得到一定浓度的阿莫西林DMSO溶液，然后采用一定浓度的甲醇水溶液将一定浓度的阿莫西林DMSO溶液稀释至系列浓度；所述系列浓度的标准克拉维酸溶液的配制方法为：采用DMSO超声溶解克拉维酸，得到一定浓度的克拉维酸DMSO溶液，然后采用一定浓度的甲醇水溶液将一定浓度的克拉维酸DMSO溶液稀释至系列浓度。 4.如权利要求2所述的阿莫西林和克拉维酸同时检测的定量分析方法，其特征在于，所述前处理包括如下步骤：将系列阿莫西林标准样品、系列克拉维酸标准样品和待测样品分别转移至样品处理管中，加入一定量的内标溶液和蛋白沉淀剂，离心分离，获得上清液。 5.如权利要求4所述的阿莫西林和克拉维酸同时检测的定量分析方法，其特征在于，所述内标溶液为阿莫西林-d4溶液或舒巴坦溶液，所述蛋白沉淀剂为甲醇乙腈混合物，所述离心条件为：离心力范围为10000-16000 g，离心时间范围为8-12分钟，离心温度为0-8摄氏度。 6.如权利要求2所述的阿莫西林和克拉维酸同时检测的定量分析方法，其特征在于，液相检测中，所述梯度洗脱条件包括如下三个阶段：第一阶段：起始流动相比例：A:B=98:2；第二阶段：流动相比例：A:B=20:80；第三阶段：流动相比例：A:B=98:2，至结束；且第二阶段时间应大于或等于1.5 min；质谱条件如下：检测方式：多反应监测MRM；扫描方式：负离子扫描；离子喷雾电压：-4000~-4500 V；气帘气：10-30 Psi；雾化气：50-70 Psi；辅助气：50-70 Psi；离子源温度：550-650℃；碰撞气种类：N2；碰撞气压力：12MPa；内标物：阿莫西林内标为阿莫西林-d4，克拉维酸内标为舒巴坦。 7.如权利要求1所述的阿莫西林和克拉维酸同时检测的定量分析方法，其特征在于，梯度洗脱条件为：起始流动相比例：A:B=98:2；步骤①：0~1.00 min，A:B=98:2；步骤②：1.00~2.00min，流动相比例由A:B=98:2匀速上升至A:B=20:80；步骤③：2.00~3.50 min，A:B=20:80；步骤④：3.50~3.51 min，流动相比例由A:B=20:80迅速下降至A:B=98:2；步骤⑤：3.51~5.00 min，A:B=98:2；其中步骤③的时间应大于等于1.5min；质谱条件如下：检测方式：多反应监测MRM；扫描方式：负离子扫描；离子喷雾电压：-4500 V；气帘气：20 Psi；雾化气：60 Psi；辅助气：60 Psi；离子源温度：600℃；碰撞气种类：N2；碰撞气压力：12MPa。 8.如权利要求1所述的阿莫西林和克拉维酸同时检测的定量分析方法，其特征在于，液相色谱仪的型号为Agilent 1100、Agilent 1200、Agilent 1260、Agilent 1290、岛津 LC-20A和岛津 LC-30A中的任意一种；液相色谱柱为Phenomenex Luna C8、Agilent ZORBAXEclipse XDB-C18、Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C8、Agilent ZORBAX Eclipse Plus-C18、Agilent ZORBAX Eclipse Plus-C8、Agilent ZORBAX SB-C18、Waters SunFire C18、Waters SunFire C8、AgelaVenusil XBP C18和AgelaVenusil XBP C8中的任意一种。 9.如权利要求8所述的阿莫西林和克拉维酸同时检测的定量分析方法，其特征在于，液相色谱柱的柱温为30-50℃；质谱仪的型号为API 4000、API 3200、API5000、4500 QTRAP、5500 QTRAP或6500 QTRAP，其中，所使用的离子源为电喷雾离子源。 10.如权利要求2所述的阿莫西林和克拉维酸同时检测的定量分析方法，其特征在于，还设有质控样品，并通过所述前处理后以所述液相-质谱条件分别检测质控样品。
所属类别：	发明专利