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原文传递一种用于血管炎性高血压联合诊断试剂盒及其应用

专利名称：	一种用于血管炎性高血压联合诊断试剂盒及其应用
摘要：	本发明公开一种用于血管炎性高血压联合诊断试剂盒及其应用，以MCP‑1、CD146、HMGB‑1、PTX‑3及抗PTX‑3抗体为特异性生物标记物，创造性的提供一种用于诊断血管炎性高血压的诊断试剂盒，与现有技术相比，该诊断试剂盒能够有效的诊断血管炎性高血压，并且成本低、便于操作，本试剂、检测试剂盒和检测技术成熟，与传统方法相比，检测更加精准，周期短、特异性好，这对于血管炎性高血压的早期诊断，早期治疗，改善预后具有广泛的实用性。
专利类型：	发明专利
申请人：	新疆维吾尔自治区人民医院
发明人：	李南方;孙乐;朱晴;王梦卉;努尔古丽·买买提;彩丽;吴婷;骆秦;索菲娅·阿布利克木;常桂娟
专利状态：	有效
申请日期：	1900-01-20T19:00:00+0805
发布日期：	1900-01-20T00:00:00+0805
申请号：	CN201911318085.7
公开号：	CN111060694A
代理机构：	西安亚信智佳知识产权代理事务所(普通合伙)
代理人：	段国刚
分类号：	G01N33/68;G;G01;G01N;G01N33;G01N33/68
申请人地址：	830001 新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市天山区天池路91号自治区人民医院
主权项：	1.一种血管炎性高血压联合诊断试剂盒，其特征在于，包括诊断早期系统性血管炎的标志物，含有MCP-1、CD146、HMGB-1、PTX-3和抗PTX-3抗体。 2.如权利要求1所述的一种血管炎性高血压联合诊断试剂盒，其特征在于，所述MCP-1、CD146、HMGB-1、PTX-3及抗PTX-3抗体从血清中检测。 3.如权利要求1所述的一种血管炎性高血压联合诊断试剂盒，其特征在于，所述的诊断试剂盒中含有检测MCP-1、CD146、HMGB-1、PTX-3及抗PTX-3抗体的含量的试剂。 4.如权利要求1所述的一种血管炎性高血压联合诊断试剂盒，其特征在于，所述的诊断试剂盒中含有： (1)MCP-1、CD146、HMGB-1、PTX-3及抗PTX-3抗体检测标准液； (2)实验标准品； (3)血清或血浆基质，以及检测溶液A和检测溶液B； (4)实验对应的96孔板。 5.一种血管炎性高血压联合诊断试剂盒的检测方法，其特征在于，所述试剂盒检测方法包括如下步骤：（1）抽取待测者的外周血2mL到促凝管，离心获取血清，直接进行检测或冻存在-80℃备检；（2）加样：分别设标准孔、待测样品孔、空白孔，设标准孔7孔，依次加入100μL不同浓度的标准品，空白孔加100μL标准品稀释液，余孔加待测样品100μL，酶标板加上覆膜，37℃温育1小时；（3）弃去液体，甩干，不用洗涤；（4）临用前配制，每孔加检测溶液A工作液100μL，酶标板覆膜，37℃温育1小时；（5）弃去孔内液体，每孔用350μL的洗涤液洗涤，浸泡1-2分钟，在吸水纸上轻拍酶标板来移除孔内所有液体，重复洗板3次，最后一次洗涤后，吸取或倒出剩余的洗涤缓冲液，将酶标板倒扣在吸水纸上，将残留在孔内的液体全部吸干；（6）临用前配制，每孔加检测溶液B工作液100μL，酶标板覆膜，37℃温育30分钟；（7）弃去孔内液体，甩干，洗板5次，方法同步骤（4）；（8）每孔加TMB底物溶液90μL，酶标板覆膜，37℃避光显色10-30分钟，当标准孔的前3-4孔有明显的梯度蓝色，后3-4孔梯度不明显时终止；（9）每孔按照底物溶液加入相同顺序加入终止液50μL；（10）在酶标板底无水滴及孔内无气泡后，立即用酶标仪在450nm波长测量各孔的光密度值（OD值）。 6.如权利要求5所述的血管炎性高血压联合诊断试剂盒的检测方法，其特征在于，所述步骤（1）血清标本的配制：准备不稀释的血清，或将血清从中吸取10uL至新管，加入PBS490uL，配成50倍稀释的血清标本。 7.如权利要求5所述的血管炎性高血压联合诊断试剂盒的检测方法，其特征在于，所述步骤（2）标准品稀释液的处理：每瓶标准品加入标准品稀释液1mL-0.5mL，盖好后室温静置大约10分钟，同时轻轻摇动，每个EP管中加入500μL的标准品稀释液。 8.如权利要求5所述的血管炎性高血压联合诊断试剂盒的检测方法，其特征在于，MCP-1标准孔中的标准浓度分别为：1000pg/mL，500pg/mL，250pg/mL，125pg/mL，62.5pg/mL，31.2pg/mL，15.6pg/mL；CD146标准孔中的标准浓度分别为：20ng/mL，10ng/mL，5ng/mL，2.5ng/mL，1.25ng/mL，0.625ng/mL，0.312ng/mL；HMGB-1标准孔中的标准浓度分别为：4000pg/mL，2000pg/mL，1000pg/mL，500pg/mL，250pg/mL，125pg/mL，62.5pg/mL；PTX-3及抗PTX-3抗体标准孔中的标准浓度分别为：20ng/mL，10ng/mL，5ng/mL，2.5ng/mL，1.25ng/mL，0.625ng/mL，0.312ng/mL。 9.如权利要求5所述的血管炎性高血压联合诊断试剂盒的检测方法，其特征在于，所述的MCP-1、CD146、HMGB-1、PTX-3及抗PTX-3抗体的标准品稀释液(0pg/mL)直接作为空白孔。
所属类别：	发明专利