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原文传递一种用于诊断膀胱癌的联合标志物及试剂盒和应用

专利名称：	一种用于诊断膀胱癌的联合标志物及试剂盒和应用
摘要：	本发明涉及血清样品中小分子代谢物甘磷酸胆碱、胱氨酸、十二碳烯酸、二十碳烯酸和鹅去氧胆酸作为联合标志物在制备用于诊断受试者中膀胱癌的试剂盒中的新应用。本发明还涉及检测受试者中的膀胱癌的试剂盒，通过检测来自受试者的血清样品中上述联合标志物各自的浓度，基于二元逻辑回归方程计算所述联合标志物变量，再基于确定的截点值，判断所述受试者是否患有膀胱癌。所述试剂盒可实现高灵敏、高效检测本发明涉及的几种小分子代谢物，且具有检测成本低，重复性好的特点。上述几种小分子代谢物联合使用，可在膀胱癌的辅助诊断中得到应用。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	辽宁;21
申请人：	中国科学院大连化学物理研究所
发明人：	许国旺;郑思佳;赵欣捷;王晴晴;王晓琳
专利状态：	有效
申请日期：	2017-10-25T00:00:00+0800
发布日期：	2019-05-03T00:00:00+0800
申请号：	CN201711007984.6
公开号：	CN109709220A
代理机构：	沈阳科苑专利商标代理有限公司
代理人：	马驰
分类号：	G01N30/02(2006.01);G;G01;G01N;G01N30
申请人地址：	116023 辽宁省大连市中山路457号
主权项：	1.一种用于诊断膀胱癌的联合标志物，包括甘磷酸胆碱、胱氨酸、十二碳烯酸、二十碳烯酸和鹅去氧胆酸。 2.联合标志物在制备用于诊断受试者中的膀胱癌的试剂盒中的应用，其中所述联合标志物包括甘磷酸胆碱、胱氨酸、十二碳烯酸、二十碳烯酸和鹅去氧胆酸。 3.一种检测受试者中的膀胱癌的试剂盒，所述试剂盒包括： (1)标准品：包括甘磷酸胆碱、胱氨酸、十二碳烯酸、二十碳烯酸和鹅去氧胆酸，所述标准品分别用于绘制对应的血清代谢物甘磷酸胆碱、胱氨酸、十二碳烯酸、二十碳烯酸和鹅去氧胆酸的定性和定量标准曲线； (2)用于预处理来自受试者的血清样品的提取液：包含内标1-13C-缬氨酸、D4-鹅脱氧胆酸、D3-棕榈酸的甲醇溶液； (3)用于洗脱色谱柱的洗脱液。 4.根据权利要求3所述的试剂盒，其中所述用于洗脱色谱柱的洗脱液是用于洗脱SeQuant ZIC-HILIC色谱柱的洗脱液。 5.根据权利要求3所述的试剂盒，其中所述洗脱液包括：流动相A：包含10mM乙酸铵和0.02％(v/v)乙酸的95％(v/v)乙腈水溶液；流动相B：包含10mM乙酸铵和0.02％(v/v)乙酸的水溶液。 6.一种通过权利要求3-5任一所述试剂盒计算受试者的血清样品中代谢物甘磷酸胆碱、胱氨酸、十二碳烯酸、二十碳烯酸和鹅去氧胆酸含量的方法；所述方法包括下述步骤： (1)利用甘磷酸胆碱、胱氨酸、十二碳烯酸、二十碳烯酸和鹅去氧胆酸标准品配制混合标准溶液并逐级稀释，之后加入内标1-13C-缬氨酸、D4-鹅脱氧胆酸、D3-棕榈酸；将溶液上样到色谱柱，洗脱，质谱检测记录所述甘磷酸胆碱、胱氨酸、十二碳烯酸、二十碳烯酸、鹅去氧胆酸及内标1-13C-缬氨酸、D4-鹅脱氧胆酸、D3-棕榈酸的洗脱峰强度；分别绘制相甘磷酸胆碱、胱氨酸、十二碳烯酸、二十碳烯酸和鹅去氧胆酸的定量标准曲线，其对应横坐标为浓度，纵坐标为代谢物峰与内标峰的相对强度； (2)用提取液预处理来自受试者的血清样品，其中所述提取液为包含内标1-13C-缬氨酸、D4-鹅脱氧胆酸、D3-棕榈酸的甲醇溶液；沉淀血清样品中的蛋白，将上清液冷冻干燥，然后用乙腈：水＝1:1(v/v)复溶，上样到色谱柱，洗脱，记录所述血清样品中的甘磷酸胆碱、胱氨酸、十二碳烯酸、二十碳烯酸、鹅去氧胆酸及内标的洗脱峰强度； (3)根据步骤(1)的定量标准曲线和步骤(2)的洗脱峰强度，计算所述受试者的血清样品中的甘磷酸胆碱、胱氨酸、十二碳烯酸、二十碳烯酸及鹅去氧胆酸的浓度；最后基于二元逻辑回归方程计算联合标志物变量。 7.根据权利要求6所述的方法，其中所述分离装置包括SeQuant ZIC-HILIC色谱柱和超高效液相色谱串联质谱仪。
所属类别：	发明专利