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原文传递一种用于检测乙酰胆碱受体抗体（AchR-Ab）的电化学发光试剂盒的制备

专利名称：	一种用于检测乙酰胆碱受体抗体（AchR-Ab）的电化学发光试剂盒的制备
摘要：	本发明公开了一种用于检测重症肌无力（MG）标志物乙酰胆碱受体抗体（AchR‑Ab）的电化学发光试剂盒及制法，制备的试剂盒包括：生物素标记的乙酰胆碱受体（AchR）工作液，三联吡啶钌标记的抗人IgG工作液，链霉亲和素偶联的磁性微粒工作液，AchR‑Ab的校准品和/或质控品工作液，含三丙胺的电化学发光底物液，清洗液，试剂盒的发光体系为电化学发光，利用链霉亲和素‑生物素信号放大系统，检测灵敏度高、线性范围宽，检测结果重复性好，特异性优异，准确性好，可以实现乙酰胆碱受体抗体的准确定量。
专利类型：	发明专利
申请人：	江苏三联生物工程有限公司
发明人：	泮锋纲;丁俊杰;施启尧
专利状态：	有效
申请日期：	1900-01-20T23:00:00+0805
发布日期：	1900-01-20T14:00:00+0805
申请号：	CN201911333608.5
公开号：	CN111007259A
分类号：	G01N33/68;G01N21/76;G01N27/26;G;G01;G01N;G01N33;G01N21;G01N27;G01N33/68;G01N21/76;G01N27/26
申请人地址：	214000 江苏省无锡市长江南路35-305号
主权项：	1.一种用于检测乙酰胆碱受体抗体（AchR-Ab）的电化学发光试剂盒，其特征在于用于检测试剂的制备，包括：(1)链霉亲和素偶联的磁性微粒工作液，(2)生物素标记的AchR抗原工作液，(3)三联吡啶钌标记的抗人IgG工作液，(4)AchR-Ab校准品工作液和/或质控品工作液，(5)清洗液以及含三丙胺的电化学发光底物液。 2.根据权利要求1所述的检测AchR-Ab的电化学发光试剂盒，其特征在于(1)中所述链霉亲和素偶联的磁性微粒工作液由pH为6.8~7.6，浓度为0.01~0.2 mol/L的磷酸盐缓冲液、Tris缓冲液、HEPES缓冲液、MOPS缓冲液中的一种配制而成，所述缓冲液含有0.05~2 wt％的牛血清白蛋白和/或酪蛋白、0.02~1 wt％的十二烷基聚乙二醇醚和/或聚乙二醇对异辛基苯基醚和/或聚氧乙烯失水山梨醇单月桂酸酯和/或月桂醇聚氧乙烯醚、0.05~0.5 wt％的proclin300和/或叠氮钠。 3.根据权利要求1-2任一项所述的检测AchR-Ab的电化学发光试剂盒，其特征在于(2-3)中所述生物素标记的AchR抗原以及三联吡啶钌标记的抗人IgG工作液由pH为6.0~7.6，浓度为0.01 ~0.2 mol/L的磷酸盐缓冲液、Tris缓冲液、HEPES缓冲液、MOPS缓冲液中的一种配制而成，所述缓冲液含有0.5~5 wt％的牛血清白蛋白、0.5~5 wt％的氯化钠、1~5 wt％的蔗糖、0.05~2 wt％的小牛血清、0.02~1 wt％的酪蛋白、0.02~1 wt％的十二烷基聚乙二醇醚和/或聚乙二醇对异辛基苯基醚和/或聚氧乙烯失水山梨醇单月桂酸酯和/或月桂醇聚氧乙烯醚、0.05~0.5 wt％的proclin 300和/或叠氮钠。 4.根据权利要求1-3任一项所述的检测AchR-Ab的电化学发光试剂盒，其特征在于(4)中所述AchR-Ab校准品工作液和/或质控品工作液由pH为6.0~7.6，浓度为0 .01 ~0.2 mol/L的磷酸盐缓冲液、Tris缓冲液、HEPES缓冲液、MES缓冲液中的一种配制而成，所述缓冲液中含有0.5~5 wt％的牛血清白蛋白、10~50 wt％的人血清、0.5~3 wt％的氯化钠、2~20 wt％的乙二醇、0.02~1 wt％的Brij35和/或Triton X-100和/或Tween 20和/或平平加O-20、0.05~0.5wt％的proclin 300和/或叠氮钠。 5.根据权利要求1所述的检测AchR-Ab的电化学发光试剂盒，其特征在于(5)中所述清洗液为pH为13以上，浓度为0.1~0.5 mol/L的KOH，所述清洗液含有0.01~2 wt％的烷基聚乙二醇类表面活性剂。 6.根据权利要求1所述的检测AchR-Ab的电化学发光试剂盒，其特征在于(5)中所述电化学发光底物液为pH为6.0~7.2，浓度为0.05~0.4 mol/L的磷酸盐缓冲液或Tris缓冲液，所述缓冲液含有0.05~0.4 mol/L的三丙胺、0.01~2 wt％的烷基聚乙二醇类表面活性剂、0.05~0.5 wt％的proclin 300和/或叠氮钠。 7.根据权利要求1~6所述的检测AchR-Ab的电化学发光试剂盒的制法，其特征在于包括：链霉亲和素偶联的磁性微粒工作液的制备，生物素标记的AchR抗原工作液的制备，三联吡啶钌标记的抗人IgG工作液的制备，清洗液及电化学发光底物液的配制，将上述制备的试剂进行分装及组装。 8.根据权利要求7所述的检测AchR-Ab的电化学发光试剂盒的制法，其特征在于，所述生物素标记的AchR抗原的制备方法为：将N-羟基琥珀酰亚胺活化的生物素与AchR抗原按照1~20: 1的摩尔比在2-8℃或室温条件下混匀反应0.5-2小时，透析或过柱除去多余的生物素，得生物素标记的AchR抗原。 9.根据权利要求7所述的检测AchR-Ab的电化学发光试剂盒的制法，其特征在于，所述三联吡啶钌标记抗人IgG的制备方法为：将pH为6.5~8.0的抗人IgG抗体溶液与Ru-NHS酯溶液混合，使抗人IgG抗体与Ru-NHS酯的质量比为5~20: 1，37℃避光反应1-3小时，然后加入甘氨酸溶液终止反应，将反应液透析除去多余的Ru-NHS酯，得三联吡啶钌标记的抗人IgG抗体。
所属类别：	发明专利