详情

原文传递检测抗LRP4抗体的电化学发光试剂盒及其制法

专利名称：	检测抗LRP4抗体的电化学发光试剂盒及其制法
摘要：	本发明涉及一种新型的从被测样本中检测低密度脂蛋白受体相关蛋白4（LRP4）抗体的电化学发光试剂盒及其制备方法。制备的试剂盒包括：包被链霉亲和素的磁珠微粒工作液，生物素标记的LRP4工作液，三联吡啶钌标记的抗人IgG抗体工作液，抗LRP4抗体的校准品和/或质控品工作液，含三丙胺的电化学发光底物液，以及清洗液。所制备试剂盒的发光体系为电化学发光，利用链霉亲和素‑生物素生物反应信号放大系统，检测速度快、灵敏度高、线性范围宽、检测结果重复性好，能够实现样本中抗LRP4抗体的准确定量检测。
专利类型：	发明专利
申请人：	江苏三联生物工程有限公司
发明人：	卜梅杰;泮锋纲;丁俊杰;施启尧
专利状态：	有效
申请日期：	1900-01-20T23:00:00+0805
发布日期：	1900-01-20T00:00:00+0805
申请号：	CN201911333714.3
公开号：	CN111060695A
分类号：	G01N33/68;G01N33/531;G01N21/76;G01N27/26;G;G01;G01N;G01N33;G01N21;G01N27;G01N33/68;G01N33/531;G01N21/76;G01N27/26
申请人地址：	214000 江苏省无锡市长江南路35-305号
主权项：	1.一种检测抗低密度脂蛋白受体相关蛋白4（LRP4）抗体的电化学发光试剂盒，其特征在于，包括：包被链霉亲和素的磁珠微粒工作液，生物素标记的LRP4工作液，三联吡啶钌标记的抗人IgG抗体工作液，抗LRP4抗体的校准品和/或质控品工作液，含三丙胺的电化学发光底物液，以及清洗液。 2.根据权利要求1所述的检测抗LRP4抗体的电化学发光试剂盒，其特征在于，所述抗人IgG抗体（即第二抗体）为单克隆抗体、多克隆抗体、单克隆抗体Fab片段或多克隆抗体Fab片段。 3.根据权利要求1所述的检测抗LRP4抗体的电化学发光试剂盒，其特征在于，所述包被链霉亲和素的磁珠微粒工作液由pH为6.8~7.6，浓度为0.01 mol/L~0.2 mol/L的磷酸盐缓冲液、Tris缓冲液、HEPES缓冲液、MOPSO缓冲液中的一种配制而成，所述缓冲液含有0.05~1wt%的牛血清白蛋白（BSA）和/或酪蛋白、0.05~1 wt%的月桂醇聚氧乙烯醚（Brij-35）和/或聚乙二醇对异辛基苯基醚（Triton X-100）和/或山梨醇酐单月桂酸酯聚氧乙烯醚（Tween-20）、0.05~0.5 wt%的proclin 300或叠氮化钠。 4.根据权利要求1所述的检测抗LRP4抗体的电化学发光试剂盒，其特征在于，所述生物素标记的LRP4抗原以及三联吡啶钌标记的抗人IgG抗体，工作液由pH为6.0~7.6，浓度为0.01 mol/L~0.2 mol/L的磷酸盐缓冲液、Tris缓冲液、HEPES缓冲液或MOPSO缓冲液中的一种配制而成，所述缓冲液含有0.5~5 wt%牛血清白蛋白、0.5~5 wt%氯化钠、1~5 wt%蔗糖、0.05~2 wt%小牛血清、0.02~1 wt%酪蛋白、0.02~1 wt%的Brij-35和/或Triton X-100和/或Tween-20、0.05~0.5 wt% proclin 300和/或叠氮化钠。 5.根据权利要求1所述的检测抗LRP4抗体的电化学发光试剂盒，其特征在于，所述检测抗LRP4抗体的电化学发光试剂盒还包括抗LRP4抗体校准品工作液和/或质控品工作液，所述抗LRP4抗体校准品和/或质控品工作液由pH为6.0~7.6，浓度为0.01 mol/L~0.2 mol/L的磷酸盐缓冲液、Tris缓冲液、HEPES缓冲液或MES缓冲液中的一种配制而成，所述缓冲液中含有0.5~5 wt%牛血清白蛋白、10~50 wt%人血清、0.5~3 wt%氯化钠、2~20 wt%乙二醇、0.02~1wt%的Brij-35和/或Triton X-100和/或Tween-20、0.05~0.5wt% proclin 300和/或叠氮化钠。 6.根据权利要求1所述的检测抗LRP4抗体的电化学发光试剂盒，其特征在于，所述电化学发光底物液由pH为6.0~7.2，浓度为0.05 mol/L~0.4 mol/L的磷酸盐缓冲液或Tris缓冲液的一种配制而成，所述缓冲液含有0.05 mol/L~0.4 mol/L三丙胺、0.01~2 wt%的Brij-35和/或Triton X-100和/或Tween-20、0.05~0.5 wt% proclin 300和/或叠氮化钠。 7.根据权利要求1任一项所述的检测抗LRP4抗体的电化学发光试剂盒，其特征在于，所述清洗液是pH ≥ 13，浓度为0.1 mol/L~0.5 mol/L的氢氧化钾溶液，所述清洗液含有0.01~2 wt%的烷基聚乙二醇类表面活性剂。 8.一种检测抗LRP4抗体的电化学发光试剂盒的制法，其特征在于，包括：包被链霉亲和素的磁珠微粒工作液的制备，生物素标记的LRP4工作液的制备，三联吡啶钌标记的抗人IgG抗体工作液的制备，电化学发光底物液的配制，以及清洗液的配制，并将上述制备的试剂进行分装及组装。 9.根据权利要求8所述的抗LRP4抗体的电化学发光试剂盒的制法，其特征在于，所述生物素标记的LRP4的制备方法为：将N-羟基琥珀酰亚胺（NHS）活化的生物素（NHS-biotin）与LRP4按照1 : 1 ~ 20 : 1的摩尔比在2~8 ℃或室温条件下混匀反应0.5~2小时，透析或过柱除去多余的NHS活化的生物素及副产物，得生物素标记的LRP4。 10.根据权利要求8所述的抗LRP4抗体的电化学发光试剂盒的制法，其特征在于，所述三联吡啶钌标记抗人IgG抗体的制备方法为：将NHS活化的三联吡啶钌（Ru-NHS）与pH为6.5~8.0的抗人IgG抗体溶液按照1 : 1 ~ 20 : 1的摩尔比在室温或37 ℃条件下，避光混匀反应1~4小时，加入甘氨酸溶液终止反应，透析除去多余的Ru-NHS及反应副产物，得三联吡啶钌标记的抗人IgG抗体。
所属类别：	发明专利