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原文传递胃肠道恶性肿瘤循环肿瘤细胞检测试剂盒及检测方法

专利名称：	胃肠道恶性肿瘤循环肿瘤细胞检测试剂盒及检测方法
摘要：	本发明公开了胃肠道恶性肿瘤循环肿瘤细胞检测试剂盒及检测方法，包括CTCs分离试剂和CTCs鉴定试剂；CTCs分离试剂包括偶联EpCAM和CSV单克隆抗体包被的免疫磁珠，CTCs鉴定试剂包括封闭液、缓冲液、固定液、透化液、染色液和封片剂。将CTCs分离试剂与含有CTCs的血液样本混合，得到分离的CTCs；将分离的CTCs与CTCs鉴定试剂混合，观察细胞染色情况，计算血液样本中的CTCs数目。本发明可同时对上皮性和间皮性CTCs进行分离，联合多种胃肠恶性肿瘤特异性抗体对富集后的细胞进行鉴定，比单一使用CK抗体的敏感度更高。大部分患者能捕捉到数十至数百个CTCs，与现有临床检测方法相比，CTCs捕捉效率大幅提升，为CTCs下游分子分析奠定了物质基础。
专利类型：	发明专利
申请人：	深圳天烁生物科技有限公司
发明人：	张磊;王四化
专利状态：	有效
申请日期：	1900-01-20T00:00:00+0805
发布日期：	1900-01-20T00:00:00+0805
申请号：	CN201911377325.0
公开号：	CN111060688A
代理机构：	深圳市中科创为专利代理有限公司
代理人：	梁炎芳;刘曰莹
分类号：	G01N33/574;G;G01;G01N;G01N33;G01N33/574
申请人地址：	518000 广东省深圳市龙华区民治街道上芬社区银泉花园9号101
主权项：	1.一种胃肠道恶性肿瘤循环肿瘤细胞检测试剂盒，其特征在于：包括CTCs分离试剂和CTCs鉴定试剂；所述CTCs分离试剂包括偶联EpCAM和CSV单克隆抗体包被的免疫磁珠，所述CTCs鉴定试剂包括封闭液、缓冲液、固定液、透化液、染色液和封片剂。 2.根据权利要求1所述的胃肠道恶性肿瘤循环肿瘤细胞检测试剂盒，其特征在于：所述染色液包括多种免疫荧光染色单克隆抗体。 3.根据权利要求2所述的胃肠道恶性肿瘤循环肿瘤细胞检测试剂盒，其特征在于：所述免疫荧光染色单克隆抗体为CK、CEA、CA72-4、CD45。 4.根据权利要求1所述的胃肠道恶性肿瘤循环肿瘤细胞检测试剂盒，其特征在于：所述封片剂含有细胞核染料。 5.根据权利要求4所述的胃肠道恶性肿瘤循环肿瘤细胞检测试剂盒，其特征在于：所述细胞核染料为DAPI。 6.一种胃肠道恶性肿瘤循环肿瘤细胞检测方法，其特征在于：包括如下步骤： S1、CTCs分离：将CTCs分离试剂与含有CTCs的血液样本混合，使免疫磁珠与CTCs结合，去除液体后得到分离的CTCs； S2、CTCs鉴定：将分离的CTCs与CTCs鉴定试剂混合，观察细胞染色情况，计算血液样本中的CTCs数目。 7.根据权利要求6所述的胃肠道恶性肿瘤循环肿瘤细胞检测方法，其特征在于：所述S2中，还包括如下步骤： S21、将分离后的CTCs加入固定液； S22、去除固定液，加入缓冲液洗涤； S23、去除缓冲液，加入封闭液； S24、去除封闭液，加入透化液； S25、去除透化液，加染色液； S26、去除染色液，加入缓冲液洗涤； S27、洗涤后的CTCs再加入缓冲液，并转移到载玻片上； S28、去除缓冲液，滴加一滴封片剂，盖上盖玻片，用指甲油封片。 S29、在荧光显微镜下观察细胞染色情况，计算CK/CEA/CA7-24+、CD45-、DAPI+细胞的总数目，作为样本中CTCs细胞的数目。 8.根据权利要求7所述的胃肠道恶性肿瘤循环肿瘤细胞检测方法，其特征在于：所述S21中，固定液为50μl；所述S22中，缓冲液为100μl；所述S23中，封闭液为50μl；所述S24中，透化液50μl；所述S25中，染色液为50μl；所述S26中，缓冲液为100μl；所述S27中，缓冲液为50μl。 9.根据权利要求7所述的胃肠道恶性肿瘤循环肿瘤细胞检测方法，其特征在于：所述S21中，固定时间为20min；所述S22中，缓冲液洗涤一次，且洗涤后直接进入S23或4℃保存；所述S23中，封闭时间为5min；所述S24中，透化时间为5min；所述S25中，染色液中的CK、CEA、CA72-4和CD45的稀释比例为1:100；所述S26中，缓冲液洗涤两次。
所属类别：	发明专利