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原文传递一种用于辅助诊断RA的试剂盒及检测方法

专利名称：	一种用于辅助诊断RA的试剂盒及检测方法
摘要：	本发明提供了一种用于辅助诊断RA的试剂盒及检测方法。该技术方案首先研究发现，不同活动期间RA患者外周血单个核细胞中的ATG5、ATG12基因的mRNA相对表达水平呈不同程度的表达差异，同时，ATG5、ATG12、Atg12‑Atg5蛋白含量也表现出相应的规律性，由此可确认，ATG5、ATG12基因表达变化或其相关蛋白含量的变化对RA的预后及活动具有一定的相关性和指向性。基于以上有益的发现，本发明开发了一种基于自噬性基因检测的RA辅助诊断试剂盒，该试剂盒以人的血清、血浆或其它体液作为生物检材，采用竞争抑制ELISA法定量测定其中ATG5、ATG12、Atg12‑Atg5偶联蛋白含量，可以此为依据来实现RA的辅助检查，并评价RA的病理特征和发展进程。
专利类型：	发明专利
申请人：	漳州卫生职业学院
发明人：	郭月丽
专利状态：	有效
申请日期：	1900-01-20T00:00:00+0805
发布日期：	1900-01-20T14:00:00+0805
申请号：	CN201911352225.2
公开号：	CN111007262A
代理机构：	广东品安律师事务所
代理人：	刘井
分类号：	G01N33/68;G01N33/577;G01N33/543;G;G01;G01N;G01N33;G01N33/68;G01N33/577;G01N33/543
申请人地址：	363000 福建省漳州市芗城区西洋坪路29号
主权项：	1.一种用于辅助诊断RA的试剂盒，其特征在于包括：分别包被有ATG5抗原、ATG12抗原、Atg12-Atg5偶联蛋白抗原的孔板；阳性质控：ATG5阳性血清，ATG12阳性血清，Atg12-Atg5偶联蛋白阳性血清；阴性质控：健康人阴性血清；工作液R：标记有HRP的抗人ATG5抗体，标记有HRP的抗人ATG12抗体，标记有HRP的抗人Atg12-Atg5偶联蛋白抗体；稀释液：去离子水； TMB底物；终止液：1mol/L的H2SO4溶液；浓缩清洗洗涤液：PBS-Tween缓冲液。 2.根据权利要求1所述的一种用于辅助诊断RA的试剂盒，其特征在于所述孔板为96孔板。 3.根据权利要求1所述的一种用于辅助诊断RA的试剂盒，其特征在于所述ATG5阳性血清，ATG12阳性血清，Atg12-Atg5偶联蛋白阳性血清各为50μL。 4.根据权利要求1所述的一种用于辅助诊断RA的试剂盒，其特征在于所述健康人阴性血清为50μL。 5.根据权利要求1所述的一种用于辅助诊断RA的试剂盒，其特征在于所述标记有HRP的抗人ATG5抗体，标记有HRP的抗人ATG12抗体，标记有HRP的抗人Atg12-Atg5偶联蛋白抗体各为150μL。 6.根据权利要求1所述的一种用于辅助诊断RA的试剂盒，其特征在于所述去离子水的体积为工作液R总体积的100倍。 7.根据权利要求1所述的一种用于辅助诊断RA的试剂盒，其特征在于所述TMB底物有15份，每份为100μL。 8.根据权利要求1所述的一种用于辅助诊断RA的试剂盒，其特征在于所述终止液有15份，每份为50μL。 9.根据权利要求1所述的一种用于辅助诊断RA的试剂盒，其特征在于所述浓缩清洗洗涤液有20份，每份为250μL。 10.一种应用权利要求1所述的试剂盒检测类风湿关节炎的方法，其特征在于包括以下步骤： 1)加样：将孔板上的孔划分为标准孔，待测样品孔，空白孔，其中所述标准孔有3孔，向3个标准孔中分别加入3种阳性质控，每种阳性质控各50μL，空白孔加50μL阴性质控，待测样品孔中加入待测样品50μL；每孔加工作液R150μL，振动混匀，孔板加覆膜，于37℃温育1小时； 2)弃去孔内液体，每孔用250μL的浓缩清洗洗涤液洗涤，浸泡1分钟，而后清除孔内所有液体；重复洗板3次，最后一次洗涤后，倒出剩余的浓缩清洗洗涤液，将酶标板倒扣在吸水纸上，将残留在孔内的液体全部吸干； 3)每孔加TMB底物100μL，酶标板加上覆膜，于37℃避光显色10～30min； 4)每孔加终止液50μL，终止反应。
所属类别：	发明专利