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原文传递用于流式细胞仪法CD45抗原检测的试剂盒及其制备方法

专利名称：	用于流式细胞仪法CD45抗原检测的试剂盒及其制备方法
摘要：	本发明公开了一种用于流式细胞仪法CD45抗原检测的试剂盒及其制备方法，包括抗体、荧光素、荧光蛋白、防腐剂、稳定剂、交联剂A、交联剂B和缓冲液。用DMSO将荧光素溶解，并与荧光蛋白以0.5‑10:0.8‑3的比例，在4‑40℃条件下避光孵育1‑18h，得到串联染料；将通过透析去除了未反应荧光素后的所述串联染料与交联剂A以1‑10：20‑100的比例，在4‑40℃条件下避光孵育1‑18h，得到活化的串联染料；将抗体与交联剂B以0.5‑8:4‑100的比例，在4‑40℃条件下避光孵育1‑18h，得到活化的抗体，将活化后的串联染料与抗体以0.3‑4:0.5‑5的比例，在4‑40℃条件下避光孵育1‑18h，得到CD45抗原检测的试剂盒。通过荧光标记抗体识别CD45+细胞对全血进行设门，便于后续用于细胞分群的其他CD系列试剂的使用。
专利类型：	发明专利
申请人：	桂林优利特医疗电子有限公司
发明人：	张娟;罗谢奥;王丽钧
专利状态：	有效
申请日期：	1900-01-20T00:00:00+0805
发布日期：	1900-01-20T21:00:00+0805
申请号：	CN201911376158.8
公开号：	CN111044732A
代理机构：	北京中济纬天专利代理有限公司
代理人：	石燕妮
分类号：	G01N33/68;G01N33/569;G01N15/14;G;G01;G01N;G01N33;G01N15;G01N33/68;G01N33/569;G01N15/14
申请人地址：	541004 广西壮族自治区桂林市高新区信息产业园D-07号
主权项：	1.一种用于流式细胞仪法CD45抗原检测的试剂盒的制备方法，其特征在于，包括：将荧光素与荧光蛋白以摩尔比0.5-10:0.8-3的比例，在4-40℃条件下避光孵育1-18h，得到串联染料；将去除了未反应荧光素后的所述串联染料与交联剂A以摩尔比1-10：20-100的比例，在4-40℃条件下避光孵育1-18h，得到活化的串联染料；将抗体与交联剂B以摩尔比0.5-8:4-100的比例，在4-40℃条件下避光孵育1-18h，得到活化的抗体；将活化后的串联染料与抗体以摩尔比0.3-4:0.5-5的比例，在4-40℃条件下避光孵育1-18h，得到CD45抗原检测的试剂盒。 2.如权利要求1所述的一种用于流式细胞仪法CD45抗原检测的试剂盒的制备方法，其特征在于，所述将荧光素与荧光蛋白以摩尔比0.5-10:0.8-3的比例，在4-40℃条件下避光孵育1-18h，得到串联染料，包括：用二甲基亚砜将荧光素溶解，并与荧光蛋白以摩尔比1:3的比例，在30℃条件下进行避光孵育3.5h，得到含有串联染料的混合溶液，其中，所述荧光素为Cy3、Cy3.5、Cy5、Cy5.5和Cy7菁染料中的任意一种或多种组合，所述荧光蛋白为多甲藻黄素-叶绿素蛋白复合物PerCP、别藻蓝素APC和藻红蛋白PE任意一种或多种组合。 3.如权利要求2所述的一种用于流式细胞仪法CD45抗原检测的试剂盒的制备方法，其特征在于，将去除了未反应荧光素后的所述串联染料与交联剂A以摩尔比1-10：20-100的比例，在4-40℃条件下避光孵育1-18h，得到活化的串联染料，包括：通过透析去除含有串联染料的所述混合溶液中的未反应的所述荧光素，并将去除了未反应荧光素后的所述串联染料与交联剂A以摩尔比1：50的比例，在室温条件下避光孵育3h，得到活化的串联染料，其中，所述交联剂A包括(N-马来酰亚胺甲基)环己烷-1-羧酸琥珀酰亚胺酯SMCC、磺基化SMCC、聚乙二醇化SMCC和3-(2-吡啶二巯基)丙酸N-羟基琥珀酰亚胺酯SPDP任意一种或多种组合。 4.如权利要求3所述的一种用于流式细胞仪法CD45抗原检测的试剂盒的制备方法，其特征在于，所述将抗体与交联剂B以摩尔比0.5-8:4-100的比例，在4-40℃条件下避光孵育1-18h，得到活化的抗体，包括：将抗体与交联剂B以摩尔比1:40的比例，在室温条件下避光孵育1h，并通过分子筛纯化方法除去未反应的交联剂小分子，得到活化的抗体，其中，所述抗体包括IgG1、IgG2、IgG3、IgG4任意一种或多种组合，所述交联剂B包括二硫苏糖醇DTT、三(2-羧乙基)膦TECP、2-甲基-6-乙基苯胺2-MEA，2-亚氨基硫烷盐酸盐Traut’s试剂和N-琥珀酰亚胺基-S-乙酰硫基乙酸酯SATA任意一种或多种组合。 5.如权利要求4所述的一种用于流式细胞仪法CD45抗原检测的试剂盒的制备方法，其特征在于，将活化后的串联染料与抗体以摩尔比0.3-4:0.5-5的比例，在4-40℃条件下避光孵育1-18h，得到CD45抗原检测的试剂盒，包括：将活化后的串联染料与抗体在室温条件下避光孵育1.5h，通过分子筛或亲和层析进行纯化，得到CD45抗原检测的试剂盒。 6.一种用于流式细胞仪法CD45抗原检测的试剂盒，其特征在于，所述用于流式细胞仪法CD45抗原检测的试剂盒包括抗体、荧光素、荧光蛋白、防腐剂、稳定剂、交联剂A、交联剂B和缓冲液，其中，所述防腐剂为NaN3、DMDMH、Proclin系列、咪唑和吡啶硫酮钠任意一种或多种组合，所述稳定剂为蔗糖、明胶、甘油、牛血清白蛋白BSA、NaCl和EDTA任意一种或多种组合，所述缓冲液为HEPES、MES、MOPS和磷酸盐缓冲液任意一种或多种组合。
所属类别：	发明专利