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原文传递一种基于单颗粒电感耦合等离子体质谱的多组分均相免疫分析方法

专利名称：	一种基于单颗粒电感耦合等离子体质谱的多组分均相免疫分析方法
摘要：	本发明的目的是提供一种基于单颗粒电感耦合等离子体质谱（spICPMS）的多组分均相免疫分析方法，通过同时对三种贵金属纳米颗粒混合探针（CA125‑AuNPs，CEA‑AgNPs，CA199‑PtNPs）的频率和强度进行分析，实现对三种胰腺癌相关抗原的同时检测。本发明的原理是：修饰有特异性抗体（CA125，CEA和CA199）的贵金属纳米颗粒探针与血清样品混合时，相应贵金属纳米探针对其对应抗原靶点的结合导致纳米探针聚集而形成聚合物。方法原理基于抗原诱导的贵金属纳米颗粒探针聚合导致溶液中聚合物总数相应降低和单个聚合物的尺寸增加。通过spICPMS对三种元素的信号区分，以及用频率和强度两种模式对聚合物数量和单个聚合物中贵金属含量的检测，即可实现对于三种抗原水平的同时评估。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	四川;51
申请人：	四川大学
发明人：	刘睿;黄自立;吕弋
专利状态：	有效
申请日期：	2020-09-18T00:00:00+0800
发布日期：	2022-03-22T00:00:00+0800
申请号：	CN202010987749.5
公开号：	CN114217062A
分类号：	G01N33/574;G01N33/68;G01N33/543;G01N33/553;G01N27/626;G;G01;G01N;G01N33;G01N27;G01N33/574;G01N33/68;G01N33/543;G01N33/553;G01N27/626
申请人地址：	610065 四川省成都市武侯区一环路南一段24号
主权项：	1.一种基于单颗粒电感耦合等离子体质谱的多组分均相免疫分析方法，其特征在于：所述分析方法包括三种贵金属抗体功能化的纳米颗粒探针（CA125标记AuNPs，CEA标记AgNPs和CA199标记PtNPs），在对应抗原存在下，可基于抗原抗体特异性识别诱导贵金属纳米颗粒探针聚集，通过单颗粒电感耦合等离子体质谱（spICPMS）同时对抗原进行定量检测。 2.如权利1所叙述的免疫方法，其特征在于，体系采用在pH 7.4的PBS缓冲溶液（0.01MpH 7.4，含137 mM NaCl和2.7 mM KCl）中进行，发明方法通过静电吸附的方式对贵金属纳米颗粒进行标记，每1 mL AuNPs溶液中加入40 μg CA125抗体对AuNPs进行修饰，每1 mLAgNPs溶液中加入40 μg CEA抗体对AgNPs进行修饰，每1 mL PtNPs溶液中加入40 μg CA199抗体对PtNPs进行修饰，探针纯化的离心条件为在4 oC下以10000 rpm的速度离心18 min，吸去上清液，重溶于PBS中。 3.修饰上特异性抗体的贵金属纳米颗粒探针，对于相应抗原存在的血清样品，会发生抗原抗体特异性识别，导致抗原诱导的贵金属纳米颗粒探针聚合，体系反应时间为2 h，温度为37 oC。 4.如权利1所叙述的检测方法，其特征在于，通过单颗粒电感耦合等离子体质谱（spICPMS）对三种贵金属元素（Au 196.967，Ag 106.905，Pt 194.965）的信号区分能力，基于抗原诱导贵金属纳米颗粒探针的聚合进行分析，达到对三种胰腺癌相关抗原进行定量检测的目的，免疫测定之前对样品稀释倍数为20000倍，spICPMS中频率模式测定的时间为10s，扫描速率为50 μs/次；强度模式测定的时间为10 s，扫描速率为50 μs/次。 5.如权利1所叙述的多组分均相免疫方法，其特征在于，通过结合spICPMS的频率和强度两种模式，实现了对三种胰腺癌相关抗原的同时分析，结合频率模式和强度模式，对三种抗原测定的线性范围为CA125 2-500 U/mL，CEA 0.8-500 ng/mL，CA199 1-1000 U/mL；检出限分别为CA125 0.43 U/mL，CEA 0.23 ng/mL，CA199 0.24 U/mL。
所属类别：	发明专利