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原文传递一种检测CMPF的化学发光免疫检测试剂盒及其检测方法

专利名称：	一种检测CMPF的化学发光免疫检测试剂盒及其检测方法
摘要：	本发明属于医学分析、检测方法技术领域，涉及一种检测CMPF的化学发光免疫检测试剂盒及其检测方法。本发明利用CMPF分别偶联两种不同的载体蛋白质作为包被（捕获）抗原和免疫抗原，使得针对免疫抗原生产的抗体能够特异性的与CMPF分子结构上的特征表位发生特异免疫反应，而不会与包被（捕获）抗原的载体蛋白发生免疫反应，从而保证精准测定CMPF的含量。本发明的化学发光检测试剂盒检测CMPF与液相色谱‑质谱联用比对有很好的一致性（R2=0.9617）；本发明提高了检测的灵敏度和准确性，又避免了液质设备高昂的投入，并且大大缩短了检测的时间。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	辽宁;21
申请人：	沈阳易康元血液透析科技有限公司
发明人：	李祝华;黄雪莹;唐亚楠;李海英;马冰
专利状态：	有效
申请日期：	2021-12-02T00:00:00+0800
发布日期：	2022-03-08T00:00:00+0800
申请号：	CN202111461910.6
公开号：	CN114152743A
代理机构：	沈阳亚泰专利商标代理有限公司
代理人：	马维骏
分类号：	G01N33/543;G01N33/53;G01N33/577;G01N21/76;G;G01;G01N;G01N33;G01N21;G01N33/543;G01N33/53;G01N33/577;G01N21/76
申请人地址：	110015 辽宁省沈阳市浑南区上深沟村858-1号B01-301室
主权项：	1.一种检测CMPF的化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，包括如下试剂： M试剂、R1试剂、R2试剂、激发液、CMPF校准品、CMPF质控品、CMPF结合蛋白解离剂；所述M试剂为链霉亲和素磁微粒，是链霉亲和素包被的超顺磁性微球，磁性微球为三氧化二铁或四氧化三铁磁性纳米颗粒与有机高分子材料形成的复合微球，复合微球表面通过改性带有一种或多种活性基团，该活性基团能够与链霉亲和素的氨基或羧基通过酰胺键进行交联形成链霉亲和素包被的磁性微球；所述R1试剂为CMPF-BSA偶联物（CMPF偶联牛血清白蛋白的人工捕获抗原）与活性生物素或活性生物素衍生物偶联形成“生物素-BSA-CMPF”抗原结合物；所述R2试剂为含吖啶脂标记的抗CMPF抗体的溶液；所述激发液由激发液I和激发液II构成；所述的CMPF校准品由3-羧基-4-甲基-5-丙基-2呋喃丙酸（CMPF）标准品加5%的牛血清白蛋白配制而成，浓度分别为0、0.1、0.5、1、2.5、5.0、7.5、10.0ug/ml；所述的CMPF质控品由3-羧基-4-甲基-5-丙基-2呋喃丙酸（CMPF）标准品加5%的牛血清白蛋白配制而成，浓度分别为0.5、5.0ug/ml；所述的CMPF结合蛋白解离剂由A、B两种溶液构成，A液为0.1%的二硫苏糖醇（含0.2%乙酸）溶液；B液为1M氢氧化钠溶液。 2.如权利要求1所述的一种检测CMPF的化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，所述M试剂中链霉亲和素磁微粒粒径为1-10um，浓度为0.2-0.8mg/ml。 3.如权利要求1所述的一种检测CMPF的化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，所述R1试剂中CMPF-BSA偶联物浓度为0.1-5ug/ml。 4.如权利要求1所述的一种检测CMPF的化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，R2试剂中所述抗CMPF抗体为以CMPF与钥孔血蓝蛋白(KLH）或卵清蛋白（OVA）偶联后免疫动物产生的单克隆抗体或多克隆抗体。 5.如权利要求1所述的一种检测CMPF的化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，所述R2试剂为吖啶脂或其衍生物与抗CMPF抗体通过酰胺键偶联形成“吖啶脂-抗CMPF抗体”结合物；抗CMPF抗体浓度为0.1-5ug/ml。 6.如权利要求1所述的一种检测CMPF的化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，所述M试剂、R1试剂和R2试剂的缓冲液为10-100mM，pH6.0-8.0的磷酸盐缓冲液、碳酸盐缓冲液、三羟甲基氨基甲烷缓冲液、柠檬酸盐缓冲液的一种或几种组合。 7.如权利要求1所述的一种检测CMPF的化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，所述的M试剂、R1试剂和R2试剂的缓冲液中加有0.05%-0.5%(v/v）的表面活性剂，表面活性剂为吐温-20或曲通X-100。 8.如权利要求1所述的一种检测CMPF的化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，所述的M试剂、R1试剂和R2试剂的缓冲液中加有0.05%-0.5%（w/v）抑菌剂，所述抑菌剂为叠氮钠或Proclin300；所述的M试剂、R1试剂和R2试剂的缓冲液中加有0.01%-0.1%牛血清白蛋白，作为蛋白稳定剂。 9.如权利要求1所述的一种检测CMPF的化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，所述激发液I由含0.01%-0.06% （w/v）过氧化氢和含0.05%-1.0%(v/v)的曲通X-100混合而成；所述激发液II为0.01-0.2M氢氧化钠溶液和含0.1%-5.0%(v/v)的曲通X-100混合而成。 10.一种检测CMPF的化学发光检测试剂盒的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1、样本：新鲜血浆或血清；取一定量的待测样本与一定量的CMPF的化学发光检测试剂盒中所述的CMPF结合蛋白解离剂A和B溶液，混合均匀，37℃温育10-20分钟，使样本中的CMPF与结合蛋白解离，游离出CMPF；上述溶液中加入一定量的R2试剂，混匀，37℃温育10-20分钟，样本中游离的CMPF与吖啶脂-CMPF抗体结合成抗原-抗体复合物；在上述反应体系中加入一定量的M试剂和R1试剂，37℃温育反应10-20分钟，使得体系中上一步反应过量的吖啶脂-CMPF抗体与R1试剂中的生物素-BSA-CMPF形成抗原-抗体结合物，并与M试剂中的链霉亲和素形成“磁珠-亲和素-生物素-BSA-CMPF-抗体-吖啶脂”复合物；步骤2、洗涤：通过外加磁场，吸附磁微粒后，洗涤去除反应体系中未能与磁微粒结合的其他物质，保留上述“磁珠-亲和素-生物素-BSA-CMPF-抗体-吖啶脂”复合物；步骤3、检测：上述复合物中分别加入激发液I和激发液II，用化学发光分析仪测定体系的发光强度，通过计算得到样本中的CMPF含量。
所属类别：	发明专利