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原文传递不同分子量范围的透明质酸钠的分离和测定分子量的方法

专利名称：	不同分子量范围的透明质酸钠的分离和测定分子量的方法
摘要：	本发明属于医药和分析检测领域，涉及一种不同分子量范围的透明质酸钠的分离和/或测定分子量的方法。具体地，一种通过高效液相色谱测定透明质酸钠样品的分子量的方法，其中，色谱条件如下：色谱柱为SRT SEC‑150(5μm,7.8x300mm)、SRT SEC‑500(5μm,7.8x300mm)和SRT SEC‑2000(5μm,7.8x300mm)三根色谱柱串联；流动相为氯化钠水溶液，浓度为0.18‑0.22mol/L，其中按照体积百分比加入0.01％‑0.05％ProClin200试剂；色谱柱温度(同检测器温度)为40℃‑50℃；流速为0.7‑0.9ml/min；并且进样体积为90‑110μl。本发明的方法有效地分离和检测不同分子量的透明质酸钠混合物且成本低；另外，使用ProClin200试剂替代流动相中常加入的叠氮钠，降低了剧毒和易爆炸的风险，提高了安全性。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	辽宁;21
申请人：	沈阳兴齐眼药股份有限公司
发明人：	刘继东;杨强;杨晨
专利状态：	有效
申请日期：	2021-12-01T00:00:00+0800
发布日期：	2022-03-01T00:00:00+0800
申请号：	CN202111455129.8
公开号：	CN114113400A
代理机构：	中国贸促会专利商标事务所有限公司
代理人：	刘海罗
分类号：	G01N30/02;G;G01;G01N;G01N30;G01N30/02
申请人地址：	110163 辽宁省沈阳市东陵区泗水街68号
主权项：	1.一种通过高效液相色谱测定透明质酸钠样品的分子量的方法，其中，色谱条件如下：色谱柱为SRT SEC-150(5μm,7.8x300mm)、SRT SEC-500(5μm,7.8x300mm)和SRT SEC-2000(5μm,7.8x300mm)三根色谱柱串联；流动相为氯化钠水溶液，浓度为0.18-0.22mol/L，其中按照体积百分比加入0.01％-0.05％ProClin200试剂；色谱柱温度(同检测器温度)为40℃-50℃；流速为0.7-0.9ml/min；并且进样体积为90-110μl。 2.根据权利要求1所述的方法，其中，三根色谱柱串联的顺序依次为： SRT SEC-150(5μm,7.8x300mm)、SRT SEC-500(5μm, 7.8x300mm)和SRT SEC-2000(5μm,7.8x300mm)； SRT SEC-150(5μm,7.8x300mm)、SRT SEC-2000(5μm,7.8x300mm)和SRT SEC-500(5μm,7.8x300mm)； SRT SEC-500(5μm,7.8x300mm)、SRT SEC-150(5μm, 7.8x300mm)和SRTSEC-2000(5μm,7.8x300mm)； SRT SEC-500(5μm,7.8x300mm)SRT SEC-2000(5μm, 7.8x300mm)和SRT SEC-150(5μm,7.8x300mm)； SRT SEC-2000(5μm,7.8x300mm)、SRT SEC-150(5μm,7.8x300mm)和SRT SEC-500(5μm,7.8x300mm)；或者 SRT SEC-2000(5μm,7.8x300mm)、SRT SEC-500(5 μm,7.8x300mm)和SRT SEC-150(5μm,7.8x300mm)。 3.根据权利要求1至2中任一权利要求所述的方法，其中，氯化钠水溶液的浓度为0.18mol/L、0.20mol/L或0.22mol/L。 4.根据权利要求1至3中任一权利要求所述的方法，其中，流动相中加入0.02％-0.03％ProClin200试剂。 5.根据权利要求1至4中任一权利要求所述的方法，其中，色谱柱温度为40℃、45℃或50℃。 6.根据权利要求1至5中任一权利要求所述的方法，其中，流速为0.7ml/min、0.8ml/min或0.9ml/min。进样体积为90μl、100μl或110μl。 7.根据权利要求1至6中任一权利要求所述的方法，其中，流动相为氯化钠水溶液，浓度为0.20mol/L，其中加入0.02％ProClin200试剂；色谱柱温度(同检测器温度)为45℃；流速为0.8ml/min；并且进样体积为100μl。 8.根据权利要求1至7中任一权利要求所述的方法，其中，使用至少4至5个已知分子量的聚苯乙烯磺酸钠制备对照品，用流动相将其分别稀释制成浓度0.04mg/ml-0.06mg/ml(优选0.05mg/ml)的溶液；优选地，聚苯乙烯磺酸钠的分子量为10K至6M；优选地，聚苯乙烯磺酸钠的分子量选自下面的任意4个或者全部5个： 67K、280K、1M、2M和5.5M；优选地，用流动相将待测样品稀释制成浓度0.04mg/ml-0.06mg/ml(优选0.05mg/ml)的溶液。 9.根据权利要求1至8中任一权利要求所述的方法，其中，通过。GPC软件进行普适校正计算线性回归方程，计算被测样品的分子量；优选地，按照下面的线性回归方程计算被测样品的分子量： Log(分子量[n])＝1.73e1-1.30V，其中，log为取对数函数值，V为保留体积。 10.根据权利要求1至9中任一权利要求所述的方法，其中，所述分子量为重均分子量。
所属类别：	发明专利