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原文传递一种基于代谢组学技术建立BmNPV抗性品系家蚕筛选标准的方法

专利名称：	一种基于代谢组学技术建立BmNPV抗性品系家蚕筛选标准的方法
摘要：	本发明涉及一种基于代谢组学技术建立BmNPV抗性品系家蚕筛选标准的方法，收集家蚕品系p50和其油蚕突变品系及这两个品系穿刺注射家蚕核型多角体病毒(BmNPV)的血淋巴样品；采集血淋巴样品的代谢图谱信息；对代谢组学数据预处理；差异显著性分析，筛选出正常蚕和油蚕突变蚕之间显著变化的代谢物，记为生物标志物。分析差异代谢物富集的代谢通路，通过代谢物数据库鉴定生物标志物，挑选出分子靶标，建立BmNPV抗性品系家蚕的筛选标准。本发明研究正常品系家蚕p50及其油蚕突变体op50在受到BmNPV感染后机体代谢通路变化的差异，筛查分子靶标用作筛选抗BmNPV家蚕的指标，建立抗病毒品系家蚕的筛查标准。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	江苏;32
申请人：	江苏科技大学
发明人：	王学杨;苏志浩;赵紫芹;吴阳春;李木旺
专利状态：	有效
申请日期：	2021-11-25T00:00:00+0800
发布日期：	2022-03-01T00:00:00+0800
申请号：	CN202111418130.3
公开号：	CN114113569A
代理机构：	南京苏高专利商标事务所(普通合伙)
代理人：	冒艳
分类号：	G01N33/50;G01N33/68;G16B20/50;G16B35/20;G16B50/00;G;G01;G16;G01N;G16B;G01N33;G16B20;G16B35;G16B50;G01N33/50;G01N33/68;G16B20/50;G16B35/20;G16B50/00
申请人地址：	212008 江苏省镇江市丹徒区长晖路666号
主权项：	1.一种基于代谢组学技术建立BmNPV抗性品系家蚕筛选标准的方法，其特征在于：包括如下步骤： (1)分别收集正常蚕p50(p50-)、油蚕op50(op50-)以及穿刺注射BmNPV后的p50(p50+)和op50(op50+)的血淋巴样品； (2)采集正常蚕p50、油蚕op50以及穿刺注射BmNPV后的p50和op50血淋巴样品的代谢图谱信息； (3)代谢组学数据的预处理； (4)数据的差异显著性分析，筛选出显著变化的代谢物，记为生物标志物； (5)代谢物的通路富集分析，并根据代谢物数据库鉴定这些生物标志物，将挑选出的分子靶标作为鉴定家蚕抗性水平的依据，建立BmNPV抗性品系家蚕的筛选标准。 2.根据权利要求1所述的基于代谢组学技术建立BmNPV抗性品系家蚕筛选标准的方法，其特征在于：步骤(2)中用以检测的血淋巴样品制备方法如下：室温解冻家蚕血淋巴，加入乙腈进行蛋白质沉淀，搅拌混合，离心后收集上清液。 3.根据权利要求1所述的基于代谢组学技术建立BmNPV抗性品系家蚕筛选标准的方法，其特征在于：步骤(2)的过程包括：对L-苯丙氨酸、L-天冬酰胺、L-鸟氨酸、L-赖氨酸、L-蛋氨酸、L-组氨酸、L-色氨酸、羟脯氨酸、L-瓜氨酸、L-脯氨酸、L-胱氨酸、L-天冬氨酸、L-谷氨酰胺、L-精氨酸、柠檬酸、α-酮戊二酸、苹果酸、琥珀酸、L-半胱氨酸、L-苯丙氨酸、L-丝氨酸、L-苏氨酸、L-酪氨酸、L-缬氨酸、丙酮酸、肌氨酸、富马酸、乳酸28种代谢物进行色谱分离，检测的28种分析物都是存在于家蚕血淋巴的内源性代谢物，使用的化学品纯度都大于98％，并且全部溶解于水。 4.根据权利要求1所述的基于代谢组学技术建立BmNPV抗性品系家蚕筛选标准的方法，其特征在于：步骤(3)数据预处理包括：通过Progenesis QI软件对原始数据进行预处理；然后根据SIMCA-P13.0软件处理得到的正交偏最小二乘判别分析结果中的相关参数R2X、R2Y和Q2，对不同组间代谢谱的差异以及代谢物的相对强度进行评估。 5.根据权利要求1所述的基于代谢组学技术建立BmNPV抗性品系家蚕筛选标准的方法，其特征在于：步骤(4)所述的差异显著性分析包括：使用SPSS 23软件分析统计学差异，通过单向方差分析和独立样本T检验分析不同血淋巴样品间的显著差异；通过Fisher分类对测得数据的诊断价值进行评估，根据逐步判别法区分p50-、op50-、p50+和op50+；利用交叉验证法评估分类准确性；选定的代谢物将通过ROC进行进一步分析，并结合OPLS-DA分析结果区分出差异显著的代谢物，记为生物标志物。 6.根据权利要求1所述的基于代谢组学技术建立BmNPV抗性品系家蚕筛选标准的方法，其特征在于：步骤(5)的过程包括：通过Metaboanalyst.ca网站分析差异代谢物富集的代谢通路，获得p50和op50应对BmNPV感染时的代谢机制，随后通过KEGG和HMDB代谢物数据库鉴定这些生物标志物，然后在其中挑选出用以检测的分子靶标，以此建立BmNPV抗性品系家蚕的筛选标准。
所属类别：	发明专利