详情

原文传递基于GC-MS联用技术的脑缺血再灌注代谢组学研究的方法

专利名称：	基于GC-MS联用技术的脑缺血再灌注代谢组学研究的方法
摘要：	本发明涉及一种在基于GC‑MS联用技术的脑缺血再灌注代谢组学(脂质组学)研究的方法。属于医药学技术领域。本发明包括如下步骤：(1)血浆样品预处理；(2)GC‑MS联用技术对血浆样品进行检测；(3)对数据进行分析：进行代谢物鉴定并找出最终的差异代谢物，通过在线分析软件对差异代谢物进行通路分析。数据分析内容主要包括：(1)利用XCMS在线数据处理软件对得到的原始数据进行处理(2)单维统计与多维统计相结合探究组别之间代谢差异(3)筛选并鉴定出对差异贡献大的变量并对其进行分析(4)利用MetaboAnalyst在线软件对代谢通路进行分析。本发明的方法简单，且减小了样本处理过程带来的误差。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	辽宁;21
申请人：	沈阳药科大学
发明人：	张铭洋;刘然;李清;毕开顺;韩克非
专利状态：	有效
申请日期：	2019-04-24T00:00:00+0800
发布日期：	2019-09-20T00:00:00+0800
申请号：	CN201910332381.6
公开号：	CN110261497A
代理机构：	沈阳杰克知识产权代理有限公司
代理人：	靳玲
分类号：	G01N30/02(2006.01);G;G01;G01N;G01N30
申请人地址：	110016 辽宁省沈阳市沈河区文化路103号
主权项：	1.一种基于GC-MS联用技术的脑缺血再灌注代谢组学研究的方法，其特征在于，包括如下步骤： (1)血浆样品预处理； (2)GC-MS联用技术对血浆样品进行检测； (3)对数据进行分析：进行代谢物鉴定并找出最终的差异代谢物，通过在线分析软件对差异代谢物进行通路分析。 2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中所述的样品通过如下方法处理：取血浆样本，加入抗氧化剂BHT，混匀。加入内标正十三烷酸，混匀，5％H2SO4-CH3OH,进行衍生化反应。冷却后，加入正己烷与饱和氯化钠溶液，涡旋，离心，取上层正己烷。重复操作一次，合并两次上清液，于室温下N2吹干，用正己烷复溶。 3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，色谱条件：色谱柱：AgilentVF-WAX ms毛细管色谱柱，30m×0.25mm×0.25μm；升温程序：初始温度100℃，以30℃/min升至180℃，再以2℃/min升至198℃，以1℃/min升至205℃，以2℃/min升至230℃，以,10℃/min升温至245℃,再以10℃/min降回230℃保持3min。载气：氦气，恒流模式，1.0mL/min，进样量：1μL，分流比为10：1；质谱条件：进样口温度：250℃；接口温度：260℃；离子源温度：230℃；电离电压：70eV；四极杆温度：150℃；溶剂延迟时间：6min；扫描方式：50—450m/z。 4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，根据保留时间和质谱图在NIST、HMDB及Metline软件上进行鉴定，得到了十六烷酸、十八烷酸、十八烯酸和十八碳二烯酸，然后在MetaboAnalyst在线软件中进行分析，并最终得到相关代谢通路。 5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)包括： (a)利用XCMS在线数据处理软件对得到的原始数据进行处理(b)单维统计与多维统计相结合探究组别之间代谢差异(c)筛选并鉴定出对差异贡献大的变量并对其进行分析(d)利用MetaboAnalyst在线软件对代谢通路进行分析。 6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)中的生物标记物为十六烷酸、十八烷酸、十八烯酸和亚油酸，优选为亚油酸。
所属类别：	发明专利