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原文传递一种羧基荧光微球表面活化方法及其应用

专利名称：	一种羧基荧光微球表面活化方法及其应用
摘要：	本发明提供了一种羧基荧光微球表面活化方法及其应用，表面活化方法包括如下步骤：S1：将羧基荧光微球置于MES缓冲液中超声分散；S2：分别配制含有DMTMM的微球活化缓冲液Ⅰ和含有PDH的微球活化缓冲液Ⅱ；S3：将步骤S2制备得到的微球活化缓冲液Ⅰ和微球活化缓冲液Ⅱ按照DMTMM和PDH质量比为1:（2‑4）的比例加入到步骤S1得到的羧基荧光微球中避光旋转活化1‑24h即得到表面活化的羧基荧光微球溶液。本发明将DMTMM和PDH组合使用用于活化羧基荧光微球，活化后的羧基荧光微球能够与抗原高效偶联，克服了现有技术中的一步法和两步法标记抗原偶联效果较差的缺点。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	天津;12
申请人：	丹娜(天津)生物科技股份有限公司
发明人：	张变强;彭洁;王丽娇;严俊;冯涛;盛长忠;粟艳;周泽奇
专利状态：	有效
申请日期：	2022-02-08T00:00:00+0800
发布日期：	2022-03-11T00:00:00+0800
申请号：	CN202210119536.X
公开号：	CN114166812A
代理机构：	天津合正知识产权代理有限公司
代理人：	王雨杰
分类号：	G01N21/64;G01N33/533;G01N33/58;G01N33/558;G01N33/569;G01N33/68;C09K11/02;G;C;G01;C09;G01N;C09K;G01N21;G01N33;C09K11;G01N21/64;G01N33/533;G01N33/58;G01N33/558;G01N33/569;G01N33/68;C09K11/02
申请人地址：	300467 天津市滨海新区中新生态城中滨大道3667号融智工业园2号楼
主权项：	1.一种羧基荧光微球表面活化方法，其特征在于：包括如下步骤： S1：将羧基荧光微球置于MES缓冲液中超声分散； S2：分别配制含有DMTMM的微球活化缓冲液Ⅰ和含有PDH的微球活化缓冲液Ⅱ； S3：将步骤S2制备得到的微球活化缓冲液Ⅰ和微球活化缓冲液Ⅱ按照DMTMM和PDH质量比为1:（2-4）的比例加入到步骤S1得到的羧基荧光微球中避光旋转活化1-24h即得到表面活化的羧基荧光微球溶液。 2.根据权利要求1所述的羧基荧光微球表面活化方法，其特征在于：所述羧基荧光微球与MES缓冲液的体积比（V/V）为1：（1-20）。 3.根据权利要求1所述的羧基荧光微球表面活化方法，其特征在于：所述步骤S3中微球活化缓冲液Ⅰ和微球活化缓冲液Ⅱ按照DMTMM和PDH质量比为1:2的比例加入到步骤S1得到的羧基荧光微球中；所述羧基荧光微球与微球活化缓冲液Ⅰ和微球活化缓冲液Ⅱ总量的体积比（V/V）为1：（0.01-5）。 4.根据权利要求1所述的羧基荧光微球表面活化方法，其特征在于：所述微球活化缓冲液Ⅰ中DMTMM的浓度为10-500 mg/mL；所述微球活化缓冲液Ⅱ中PDH的浓度为10-500 mg/mL。 5.根据权利要求1所述的羧基荧光微球表面活化方法，其特征在于：所述羧基荧光微球的粒径范围为100-300nm。 6.根据权利要求1所述的羧基荧光微球表面活化方法，其特征在于：所述MES缓冲液的浓度为10-200mM，pH值为4.5-9.0。 7.一种由权利要求1-6任一所述的方法得到的表面活化的羧基荧光微球。 8.一种应用权利要求7所述的表面活化的羧基荧光微球标记多糖类抗原的方法，其特征在于：所述方法包括如下步骤： a、向表面活化的羧基荧光微球溶液中添加浓度为5-30μg/mL的抗原溶液进行标记，避光反应1-24h； b、加入含有1-10%（w/v）BSA的封闭液避光旋转混匀，封闭时间为1-24 h； c、用磷酸盐缓冲液洗去未参与反应的抗原，反复清洗2-5遍； d、将微球标记物保存在微球复溶液中即得到羧基荧光微球标记的多糖类抗原。 9.根据权利要求8所述的表面活化的羧基荧光微球标记多糖类抗原的方法，其特征在于：所述步骤b中封闭液为含10%（w/v）BSA的50mM MES缓冲液，pH值为6.0封闭时间为1-2h。 10.权利要求8或9所述的方法制备得到的羧基荧光微球标记的多糖类抗原。 11.一种包含权利要求10所述的羧基荧光微球标记的多糖类抗原的荧光免疫层析试纸条。
所属类别：	发明专利