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原文传递一种用于真核细胞样本的冷冻电镜制样方法

专利名称：	一种用于真核细胞样本的冷冻电镜制样方法
摘要：	本发明公开了一种用于真核细胞样本的冷冻电镜制样方法，属于冷冻电镜制样领域。所述方法包括以下步骤：以冷冻电镜的载网作为基底，在所述基底上负载纳米氧化铝薄膜，然后将其在‑175℃~‑160℃液态乙烷中处理3‑5min；向冷冻后的载网上添加待测样品形成超薄液膜，置于液态氮中冷冻保存待用。本发明通过直接在冷冻电镜上负载纳米氧化铝薄膜作为支持膜，操作简单易实现；利用纳米氧化铝薄膜导电性强、机械性能高、亲水性好等性质，将其负载于冷冻电镜载网后，由于纳米氧化铝薄膜表面存在丰富的失配键和欠氧键，孔洞丰富，易于吸附细胞，促使细胞均匀单层分布，利于提高细胞样品冷冻制样的观察效果。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	湖南;43
申请人：	中南大学湘雅医院
发明人：	匡栩源;王锷;王露;陈娜;彭争荣;柏素芬
专利状态：	有效
申请日期：	2022-02-14T00:00:00+0800
发布日期：	2022-03-11T00:00:00+0800
申请号：	CN202210131271.5
公开号：	CN114166878A
代理机构：	北京盛询知识产权代理有限公司
代理人：	袁善民
分类号：	G01N23/2202;G;G01;G01N;G01N23;G01N23/2202
申请人地址：	410000 湖南省长沙市湘雅路87号
主权项：	1.用于真核细胞样本的冷冻电镜制样方法，其特征在于，包括以下步骤：以冷冻电镜的载网作为基底，在所述基底上负载纳米氧化铝薄膜，然后将其在-175℃~-160℃液态乙烷中处理3-5min；向冷冻后的载网上添加待测样品形成超薄液膜，置于液态氮中冷冻保存待用。 2.根据权利要求1所述的用于真核细胞样本的冷冻电镜制样方法，其特征在于，所述载网为石墨烯载网。 3.根据权利要求1所述的用于真核细胞样本的冷冻电镜制样方法，其特征在于，所述基底上负载纳米氧化铝薄膜包括以下步骤：（1）将聚偏氟乙烯和聚乙烯吡咯烷酮溶解在N,N-二甲基乙酰胺中，超声30-40min，形成覆膜液；（2）将所述载网置于所述覆膜液中进行处理，然后再向其中加入质量分数为1.5%的纳米Al2O3和0.05%的分散剂，超声反应15-20h，之后将所述载网浸泡在去离子水中，成膜待用。 4.根据权利要求3所述的用于真核细胞样本的冷冻电镜制样方法，其特征在于，所述聚偏氟乙烯、所述聚乙烯吡咯烷酮和所述N,N-二甲基乙酰胺的质量比为（15-20）:（86-90）:1。 5.根据权利要求3所述的用于真核细胞样本的冷冻电镜制样方法，其特征在于，所述分散剂为焦磷酸钠、多偏磷酸钠或酒石酸钠。 6.根据权利要求3所述的用于真核细胞样本的冷冻电镜制样方法，其特征在于，步骤（1）中，超声处理温度为63℃。 7.根据权利要求3所述的用于真核细胞样本的冷冻电镜制样方法，其特征在于，步骤（2）中，超声反应温度为55℃，在超声反应之后，浸泡去离子水之前，还包括脱泡处理。 8.根据权利要求1所述的用于真核细胞样本的冷冻电镜制样方法，其特征在于，所述待测样品为细胞样品。 9.根据权利要求8所述的用于真核细胞样本的冷冻电镜制样方法，其特征在于，所述细胞样品为将所采集的细胞培养到汇合度85%-95%，并且进行传代培养后，取其对数生长期的细胞，然后对其用pH7.0 Tris-HCl缓冲液进行终止反应。 10.根据权利要求1所述的用于真核细胞样本的冷冻电镜制样方法，其特征在于，所述纳米氧化铝薄膜的厚度为5-10nm。
所属类别：	发明专利