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原文传递一种体外筛选新型冠状病毒抑制剂的方法

专利名称：	一种体外筛选新型冠状病毒抑制剂的方法
摘要：	本发明提供一种体外筛选新型冠状病毒抑制剂的方法，属于生物分析检测领域。该方法通过体外检测荧光能量共振转移(FRET)信号变化来筛选抑制剂分子。具体的方法是，首先通过基因工程方法分别在新型冠状病毒的受体结合蛋白(RBD)及其受体人源血管紧张素转化酶2(hACE2)融合上标签蛋白，分别用FRET给‑受体荧光小分子分别标记这两个蛋白。在溶液中，用给体分子激发光激发，由于hACE2和RBD蛋白相互作用，发射受体分子荧光。当加入新冠病毒抑制剂后，hACE2和RBD蛋白被解离，此时，分子受体的荧光减弱，而给体荧光增强。应用该方法，可以在体外筛选新冠病毒抑制剂分子，具有灵敏、快速的特点。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	辽宁;21
申请人：	中国科学院大连化学物理研究所
发明人：	徐兆超;苗露
专利状态：	有效
申请日期：	2020-09-23T00:00:00+0800
发布日期：	2022-03-29T00:00:00+0800
申请号：	CN202011005640.3
公开号：	CN114252622A
代理机构：	沈阳晨创科技专利代理有限责任公司
代理人：	张晨
分类号：	G01N33/68;G01N21/64;A61K45/00;A61P31/14;G;A;G01;A61;G01N;A61K;A61P;G01N33;G01N21;A61K45;A61P31;G01N33/68;G01N21/64;A61K45/00;A61P31/14
申请人地址：	116023 辽宁省大连市中山路457号
主权项：	1.一种体外筛选新型冠状病毒抑制剂的方法，其特征在于，该方法基于RBD与ACE2相互作用，通过体外检测荧光能量共振转移(FRET)信号变化来筛选抑制剂分子。 2.根据权利要求1所述的体外筛选新型冠状病毒抑制剂的方法，其特征在于，该方法分别在新型冠状病毒的受体结合蛋白(RBD)及其受体人源血管紧张素转化酶2(hACE2)融合上标签蛋白，分别用FRET给-受体荧光小分子分别标记RBD和hACE2，在溶液中，用给体分子激发光激发，检测给体荧光强弱实现新型冠状病毒抑制剂的筛选。 3.根据权利要求1所述的体外筛选新型冠状病毒抑制剂的方法，其特征在于，该筛选步骤为： (1)分别用FRET给-受体荧光团标记hACE2和新冠病毒RBD蛋白，并纯化； (2)在溶液中加入荧光标记后的hACE2和RBD蛋白；用荧光给体的波长激发，采集荧光光谱； (3)加入带筛选的分子，孵育5-30分钟，用荧光给体的波长激发，采集荧光光谱； (4)分析光谱数据，得出筛选结果。 4.根据权利要求1所述的体外筛选新型冠状病毒抑制剂的方法，其特征在于：步骤(1)所述的hACE2蛋白为hACE2与标签蛋白的融合蛋白，是分别将SNAP、Halo或者CLIP标签蛋白融合在hACE2蛋白的N端或者C端。 5.根据权利要求1所述的体外筛选新型冠状病毒抑制剂的方法，其特征在于：步骤(1)所述的RBD蛋白为hACE2与标签蛋白的融合蛋白，是分别将SNAP、Halo或者CLIP标签蛋白融合在RBD蛋白的N端或者C端。 6.根据权利要求1所述的体外筛选新型冠状病毒抑制剂的方法，其特征在于：步骤(1)所述的FRET给-受体荧光团为带有标签蛋白专一底物的荧光分子。 7.根据权利要求1所述的体外筛选新型冠状病毒抑制剂的方法，其特征在于：步骤(4)的光谱数据的分析，结果为加了待筛选分子的RBD-hACE2溶液荧光光谱中，如果受体荧光减弱，给体荧光增强，则说明该分子有抑制hACE2与RBD蛋白相互作用的能力。 8.一种如权利要求1-7任一所述方法筛选的新型冠状病毒抑制剂，其特征在于，该抑制剂为hACE2抑制剂或RBD抑制剂。 9.一种如权利要求8所述的新型冠状病毒抑制剂在治疗新型冠状病毒药物中的应用。
所属类别：	发明专利