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原文传递基于等离子共振的非洲猪瘟抗体定量检测方法

专利名称：	基于等离子共振的非洲猪瘟抗体定量检测方法
摘要：	本发明提供了一种基于等离子共振的非洲猪瘟抗体定量检测方法，包括：准备无底孔板以及纳米光学传感器芯片；制备纳米金颗粒，用于放大检测信号；配制p30抗体质控样品，用于判定样品中的p30抗体的阴阳性；配置反应缓冲液试剂作为第一试剂，然后用p30蛋白标记纳米金颗粒制成第二试剂；将第一试剂加入多孔微孔板中，其中多孔微孔板中配置有纳米光学传感器芯片，之后加入待测样品或者质控品，并使之混合均匀；将第二试剂加入多孔微孔板内的溶液中；通过检测加样前后预定波长下的吸光度差值，实现p30抗体检测。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	上海;31
申请人：	量准(上海)医疗器械有限公司
发明人：	胡文君;刘钢;许浩;黄丽萍
专利状态：	有效
申请日期：	2022-09-23T00:00:00+0800
发布日期：	2023-01-24T00:00:00+0800
申请号：	CN202211170894.X
公开号：	CN115639146A
代理机构：	北京金蓄专利代理有限公司
代理人：	洪涛
分类号：	G01N21/01;G01N21/31;G01N21/41;G01N33/569;G01N33/577;G;G01;G01N;G01N21;G01N33;G01N21/01;G01N21/31;G01N21/41;G01N33/569;G01N33/577
申请人地址：	201506 上海市金山区金山工业区天工路857号2幢2层北面
主权项：	1.一种基于等离子共振的非洲猪瘟抗体定量检测方法，其特征在于包括：第一步骤：准备无底孔板以及纳米光学传感器芯片；第二步骤：制备纳米金颗粒，用于放大检测信号；第三步骤：配制p30抗体质控样品，用于判定样品中的p30抗体的阴阳性；第四步骤：配置反应缓冲液试剂作为第一试剂，然后用p30蛋白标记纳米金颗粒制成第二试剂；第五步骤：将第一试剂加入多孔微孔板中，其中多孔微孔板中配置有纳米光学传感器芯片，之后加入待测样品或者质控品，并使之混合均匀；第六步骤：将第二试剂加入多孔微孔板内的溶液中；第七步骤：通过检测加样前后预定波长下的吸光度差值，实现p30抗体检测。 2.根据权利要求1所述的基于等离子共振的非洲猪瘟抗体定量检测方法，其特征在于，采用复制成形工艺制备纳米光学传感器芯片。 3.根据权利要2所述的基于等离子共振的非洲猪瘟抗体定量检测方法，其特征在于，采用复制成形工艺制备纳米光学传感器芯片包括：利用激光干涉光刻在石英基板上制作锥形纳米柱图案，然后将紫外光固化聚合物NOA-61均匀散布在模具上，顶部以聚对苯二甲酸乙二醇酯支撑；用紫外光进行固化处理，然后将聚对苯二甲酸乙二醇酯基板连同周期性纳米孔道图案从模具上仔细剥除；通过电子束蒸发沉积形成一个钛粘附层和一个黄金层，以实现等离激元器件成形，然后利用射频等离子体溅射沉积二氧化钛谐振腔层，而后通过钛粘附层和顶部黄金层的电子束蒸发形成纳米谐振腔。 4.根据权利要求1或2所述的基于等离子共振的非洲猪瘟抗体定量检测方法，其特征在于，制备粒径为13～15nm纳米金颗粒。 5.根据权利要求1或2所述的基于等离子共振的非洲猪瘟抗体定量检测方法，其特征在于，制备纳米金颗粒的方法如下，在100ml去离子水中加入1ml 1％氯金酸溶液，加热至沸腾，然后再加入4mL 1％柠檬酸三钠溶液，继续加热并采用磁力搅拌器进行搅拌，溶液颜色会由黑色变至橙红色，待溶液颜色恒定，再加热15分钟后停止加热。静置，冷却至室温，即可得到澄清透亮的Au纳米颗粒分散溶液，即最终的纳米金颗粒。 6.根据权利要求1或2所述的基于等离子共振的非洲猪瘟抗体定量检测方法，其特征在于，配制p30抗体质控样品的方法如下，采用250μg/ml的P30抗体溶液为母液，稀释配制为250ng/ml阳性质控品的溶液，稀释底液为PBS缓冲液，阴性质控品为未加P30抗体的PBS缓冲液。 7.根据权利要求1或2所述的基于等离子共振的非洲猪瘟抗体定量检测方法，其特征在于，p30蛋白标记纳米金颗粒的方法包括：用0.1MK2CO3溶液调节纳米金颗粒溶液pH至p30的蛋白等电点，加入终浓度为6μg/ml的p30蛋白，混合后室温孵育，然后加入终浓度为1％的牛血清白蛋白阻断液后室温孵育1；设置离心机转速为9000rpm/min，离心25分钟，进行离以去除上清，用去离子水复溶至原溶液体积的1/4。 8.根据权利要求1或2所述的基于等离子共振的非洲猪瘟抗体定量检测方法，其特征在于，预定波长为590-600nm波长范围内的波长。 9.根据权利要求1或2所述的基于等离子共振的非洲猪瘟抗体定量检测方法，其特征在于，通过检测加样前后预定波长下的吸光度差值实现p30抗体检测包括：利用酶标仪在预定波长范围内测定多孔微孔板中的混合物反应体系的吸光度值OD1；利用酶标仪在所述预定波长范围内测定第三步骤的混合物反应体系的吸光度值OD2；针对样品、阴性质控品和阳性质控品，计算吸光度变化值△OD＝(OD2-OD1)；结果判断：如果(△OD620)样品＞(△OD620)阴性质控品+[(△OD620)阳性质控品-(△OD620)阴性质控品]15％，结果判断为阳性；如果(△OD620)样品≤(△OD620)阴性质控品+[(△OD620)阳性质控品-(△OD620)阴性质控品]15％，结果判断为阳性其中，(△OD620)样品指的是样品在预定波长下的吸光度变化值，(△OD620)阴性质控品指的是阴性质控品在预定波长下的吸光度变化值，(△OD620)阳性质控品指的是阳性质控品在预定波长下的吸光度变化值。